| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 符号与缩略语说明 | 第17-18页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-38页 |
| 第一节 二甲戊灵概述 | 第20-23页 |
| 1 二甲戊灵简介 | 第20-21页 |
| 2 二甲戊灵的除草机理与使用对象 | 第21页 |
| 3 二甲戊灵的毒性和环境危害 | 第21-22页 |
| 4 二甲戊灵残留的检测分析方法 | 第22-23页 |
| 第二节 二甲戊灵降解研究进展 | 第23-30页 |
| 1 光化学降解 | 第23-24页 |
| 2 二甲戊灵的微生物降解 | 第24-30页 |
| 2.1 二甲戊灵对环境微生物的影响 | 第24-25页 |
| 2.2 二甲戊灵的微生物降解 | 第25-30页 |
| 第三节 细菌硝基还原酶的研究进展 | 第30-35页 |
| 1 细菌硝基还原酶的分类 | 第30-32页 |
| 2 Ⅰ型硝基还原酶的晶体结构 | 第32页 |
| 3 Ⅰ型硝基还原酶的催化机制 | 第32-33页 |
| 4 Ⅰ型硝基还原酶的应用 | 第33-35页 |
| 第四节 本论文的研究目的和意义 | 第35-38页 |
| 1 国内外二甲戊灵微生物降解相关研究的不足 | 第35页 |
| 2 本论文的研究目标和内容 | 第35页 |
| 3 本论文的意义 | 第35-36页 |
| 4 本论文技术路线图 | 第36-38页 |
| 第二章 二甲戊灵降解菌株的分离及鉴定 | 第38-62页 |
| 第一节 二甲戊灵降解菌株的分离与鉴定 | 第39-51页 |
| 1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 1.1 试剂与培养基 | 第39页 |
| 1.2 二甲戊灵降解菌株的富集、筛选与纯化 | 第39-40页 |
| 1.3 二甲戊灵的检测 | 第40页 |
| 1.4 菌株表型特征分析 | 第40-41页 |
| 1.5 生理生化性状的测定 | 第41-42页 |
| 1.6 降解菌株的16S rRNA基因序列的扩增与测定 | 第42-44页 |
| 1.7 DNA-DNA杂交 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-51页 |
| 2.1 二甲戊灵降解菌株的分离纯化 | 第44-46页 |
| 2.2 菌株Y3的生理生化鉴定 | 第46-48页 |
| 2.3 菌株Y3的16S rRNA基因序列系统发育进化分析 | 第48-50页 |
| 2.4 DNA-DNA杂交 | 第50-51页 |
| 第二节 菌株Y的降解特性研究 | 第51-59页 |
| 1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 1.1 培养基、菌株与试剂 | 第51页 |
| 1.2 菌株Y3对二甲戊灵的降解特性研究 | 第51-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-59页 |
| 2.1 温度对菌株Y3降解二甲戊灵的影响 | 第53-54页 |
| 2.2 pH对菌株Y3降解二甲戊灵的影响 | 第54页 |
| 2.3 接种量对菌株Y3降解二甲戊灵的影响 | 第54-55页 |
| 2.4 二甲戊灵初始浓度对菌株Y3降解二甲戊灵的影响 | 第55页 |
| 2.5 菌株Y3对其他二硝基苯胺类除草剂的降解 | 第55-57页 |
| 2.6 菌株Y3对其他硝基芳烃类农药的降解 | 第57-59页 |
| 本章小结 | 第59-60页 |
| 本章讨论 | 第60-62页 |
| 第三章 菌株Y3降解二甲戊灵的代谢产物鉴定和代谢途径分析 | 第62-74页 |
| 1 材料与方法 | 第62-63页 |
| 1.1 试剂、培养基与菌株 | 第62页 |
| 1.2 菌株Y3对二甲戊灵的利用和降解研究 | 第62-63页 |
| 1.3 代谢产物的HPLC-MS/MS检测分析 | 第63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-70页 |
| 2.1 菌株Y3以二甲戊灵为唯一碳源的利用转化 | 第63-64页 |
| 2.2 菌株Y3以二甲戊灵为唯一氮源的利用转化 | 第64-65页 |
| 2.3 二甲戊灵代谢产物的HPLC-MS/MS分析 | 第65-70页 |
| 本章小结 | 第70-71页 |
| 本章讨论 | 第71-74页 |
| 第四章 菌株Y3中二甲戊灵硝基还原酶基因的克隆与鉴定 | 第74-118页 |
| 第一节 菌株Y3粗酶液特性研究 | 第76-82页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 1.1 材料与试剂 | 第76页 |
| 1.2 菌株Y3粗酶液的制备 | 第76-77页 |
| 1.3 粗酶液中蛋白含量的测定 | 第77页 |
| 1.4 粗酶液酶活测定 | 第77页 |
| 1.5 温度对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性的影响 | 第77页 |
| 1.6 pH对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性的影响 | 第77-78页 |
| 1.7 金属离子和EDTA对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性的影响 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-82页 |
| 2.1 菌株Y3粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性测定 | 第78-79页 |
| 2.2 温度对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性影响 | 第79页 |
| 2.3 pH对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性的影响 | 第79-80页 |
| 2.4 金属离子和EDTA对粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶活性的影响 | 第80-81页 |
| 2.5 菌株Y3粗酶液二甲戊灵硝基还原酶纯化条件 | 第81-82页 |
| 第二节 菌株Y3二甲戊灵硝基还原酶基因pnr的克隆与鉴定 | 第82-104页 |
| 1 材料与方法 | 第82-93页 |
| 1.1 试剂与仪器 | 第82页 |
| 1.2 本章节所用的菌株与质粒 | 第82页 |
| 1.3 本章节所用引物 | 第82-83页 |
| 1.4 菌株Y3基因组框架图测序 | 第83-84页 |
| 1.5 菌株Y3粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶的纯化 | 第84-86页 |
| 1.6 二甲戊灵硝基还原酶的查找 | 第86页 |
| 1.7 二甲戊灵硝基还原酶基因pnr的异源表达 | 第86-89页 |
| 1.8 PNR的酶活测定 | 第89页 |
| 1.9 PNR转化二甲戊灵的产物鉴定 | 第89-90页 |
| 1.10 二甲戊灵硝基还原酶基因pnr在二甲戊灵诱导条件下的表达 | 第90-93页 |
| 2 结果与分析 | 第93-104页 |
| 2.1 菌株Y3基因组DNA框架图的测序 | 第93-94页 |
| 2.2 粗酶液中二甲戊灵硝基还原酶的纯化 | 第94-95页 |
| 2.3 菌株Y3粗酶液纯化的二甲戊灵硝基还原酶Native-PAGE电泳 | 第95-96页 |
| 2.4 二甲戊灵硝基还原酶的获取 | 第96页 |
| 2.5 硝基还原酶PNR的氨基酸序列进化分析 | 第96-98页 |
| 2.6 pnr基因的异源表达 | 第98-100页 |
| 2.7 PNR转化二甲戊灵的产物鉴定 | 第100-101页 |
| 2.8 pnr基因在二甲戊灵诱导下的转录 | 第101-104页 |
| 第三节 二甲戊灵硝基还原酶PNR的酶学特性研究 | 第104-114页 |
| 1 材料与方法 | 第104-105页 |
| 1.1 菌株与试剂 | 第104页 |
| 1.2 PNR的诱导表达、纯化和酶活测定 | 第104页 |
| 1.3 pH值和温度对PNR活性和稳定性的影响 | 第104-105页 |
| 1.4 金属离子和化学试剂对PNR活性的影响 | 第105页 |
| 1.5 PNR的底物特异性 | 第105页 |
| 1.6 PNR对不同底物的V_(max)和K_m值测定 | 第105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-114页 |
| 2.1 pH值和温度对PNR酶活和酶活稳定性的影响 | 第105-107页 |
| 2.2 金属离子和化学试剂对PNR活性的影响 | 第107-108页 |
| 2.3 PNR的底物特异性 | 第108-111页 |
| 2.4 PNR对不同底物V_(max)和K_m的测定 | 第111-114页 |
| 本章小结 | 第114-116页 |
| 本章讨论 | 第116-118页 |
| 全文总结 | 第118-120页 |
| 主要创新点 | 第120-122页 |
| 今后展望 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-136页 |
| 附录一 培养基与试剂配方 | 第136-139页 |
| 1 培养基配方 | 第136页 |
| 2 试剂配方 | 第136-139页 |
| 附录二 Bacillus subtilis Y3的16S rRNA基因序列 | 第139-140页 |
| 附录三 Bacillus subtilis Y3中的pnr基因序列 | 第140-142页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和受通的专利 | 第142-144页 |
| 致谢 | 第144页 |
