| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第17-30页 |
| 1.1 纤维素酶系简介 | 第18-21页 |
| 1.1.1 纤维素酶系组成及酶解 | 第18-19页 |
| 1.1.2 半纤维素酶系组成及其酶解 | 第19-20页 |
| 1.1.3 多糖单加氧化酶在木质纤维素降解过程中具有重要作用 | 第20-21页 |
| 1.2 真菌纤维素酶诱导和调控表达机理 | 第21-26页 |
| 1.2.1 底物对纤维素酶诱导 | 第21-22页 |
| 1.2.2 糖转运蛋白在纤维素酶诱导过程中的作用 | 第22页 |
| 1.2.3 丝状真菌纤维素酶调控转录因子研究现状 | 第22-23页 |
| 1.2.4 木质纤维素水解酶转录激活因子 | 第23-24页 |
| 1.2.5 木质纤维素水解酶转录抑制因子 | 第24-25页 |
| 1.2.6 纤维素水解酶表达分泌中氮调控相关转录因子的作用 | 第25-26页 |
| 1.3 嗜热毁丝霉属真菌简介 | 第26-27页 |
| 1.4 粗糙脉孢菌 | 第27-28页 |
| 1.4.1 粗糙脉孢菌简介 | 第27页 |
| 1.4.2 粗糙脉孢菌研究现状 | 第27-28页 |
| 1.4.3 粗糙脉孢菌对纤维素降解在组学水平的研究 | 第28页 |
| 1.5 本课题研究目的及意义 | 第28-30页 |
| 第2章 材料和方法 | 第30-58页 |
| 2.1 主要仪器及生化试剂 | 第30-32页 |
| 2.2 主要菌株及质粒 | 第32-34页 |
| 2.3 主要引物 | 第34-36页 |
| 2.4 主要生物试剂 | 第36-38页 |
| 2.5 主要培养基配制 | 第38-40页 |
| 2.6 分子克隆操作 | 第40-45页 |
| 2.6.1 E.coil菌落PCR验证 | 第40页 |
| 2.6.2 片段PCR扩增 | 第40-41页 |
| 2.6.3 质粒DNA或PCR产物的酶切 | 第41-42页 |
| 2.6.4 目的片段与载体的连接 | 第42页 |
| 2.6.5 E.coli感受态细胞的转化 | 第42-43页 |
| 2.6.6 碱裂解法小提质粒DNA(试剂盒) | 第43页 |
| 2.6.7 快速琼脂糖凝胶DNA回收(试剂盒) | 第43-44页 |
| 2.6.8 快速DNA产物纯化(试剂盒) | 第44页 |
| 2.6.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| 2.6.10 SDS-PAGE电泳 | 第44-45页 |
| 2.7 粗糙脉孢菌基因组的提取 | 第45-46页 |
| 2.8 嗜热毁丝霉基因组提取 | 第46页 |
| 2.9 丝状真菌RNA提取及纯化 | 第46-47页 |
| 2.10 RNA反转录 | 第47-48页 |
| 2.11 qRT-PCR | 第48页 |
| 2.12 RNA-seq和数据分析 | 第48-49页 |
| 2.13 粗糙脉孢菌电转方法 | 第49页 |
| 2.14 根癌农杆菌转化方法 | 第49-50页 |
| 2.15 根癌农杆菌介导的嗜热毁丝霉遗传转化方法 | 第50-51页 |
| 2.16 原生质体介导的嗜热毁丝霉转化方法 | 第51-52页 |
| 2.17 粗糙脉孢菌有性杂交及杂交突变体筛选 | 第52-55页 |
| 2.17.1 生物量测定 | 第53页 |
| 2.17.2 蛋白浓度测定 | 第53-54页 |
| 2.17.3 纤维素酶活测定 | 第54-55页 |
| 2.18 Southern分析 | 第55-57页 |
| 2.19 粗糙脉孢菌及嗜热毁丝霉的培养及保存 | 第57-58页 |
| 第3章 结果与分析 | 第58-86页 |
| 3.1 粗糙脉孢菌Zn_2Cys_6家族突变体库筛选 | 第58-59页 |
| 3.2 △cer-3和△cer-4菌株鉴定 | 第59-60页 |
| 3.3 △cer-3和△cer-4蛋白浓度和木质纤维素酶活的测定 | 第60-61页 |
| 3.4 △cer-3和△cer-4在木聚糖条件下半纤维素酶的测定 | 第61-62页 |
| 3.5 △cer-3和△cer-4在基本培养基中的生长 | 第62-63页 |
| 3.6 △cer-3和△cer-4回补菌株的构建及表型分析 | 第63-66页 |
| 3.6.1 △cer-3和△cer-4回补质粒构建 | 第63-64页 |
| 3.6.2 △cer-3和△cer-4纯核回补菌株获得 | 第64页 |
| 3.6.3 △cer-3和△cer-4回补菌株的表型分析 | 第64-66页 |
| 3.7 cer-3和cer-4过表达菌株的构建及表型分析 | 第66-70页 |
| 3.7.1 cer-3和cer-4过表达质粒的构建 | 第66-67页 |
| 3.7.2 cer-3和cer-4纯核过表达菌株获得 | 第67页 |
| 3.7.3 cer-3和cer-4过表达菌株的表型分析 | 第67-70页 |
| 3.8 纤维素诱导条件下△cer-3和△cer-4的转录组分析 | 第70-74页 |
| 3.9 qRTPCR分析纤维素酶基因表达水平 | 第74-76页 |
| 3.10 CER-3和CER-4在丝状真菌中的进化分析 | 第76-80页 |
| 3.10.1 嗜热毁丝霉ku70敲除盒构建 | 第77-78页 |
| 3.10.2 嗜热毁丝霉ku70敲除菌株获得 | 第78页 |
| 3.10.3 嗜热毁丝霉ku70敲除菌株Southern blotting验证 | 第78-79页 |
| 3.10.4 嗜热毁丝霉野生型菌株和△ku70菌株间表型比较 | 第79-80页 |
| 3.11 cer-3和cer-4异源表达菌株构建 | 第80-82页 |
| 3.11.1 cer-3和cer-4异源表达质粒构建 | 第80-81页 |
| 3.11.2 cer-3和cer-4异源表达纯化菌株获得 | 第81-82页 |
| 3.12 cer-3和cer-4异源表达菌株蛋白浓度和纤维素酶活测定 | 第82-83页 |
| 3.13 qRTPCR分析T1CER-3和T1CER-4纤维素酶基因表达水平 | 第83-86页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 附录 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
