| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-16页 |
| 第一部分：多发性骨髓瘤侧群细胞的生物学特性分析 | 第16-36页 |
| 1 前言 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-27页 |
| 2.1 实验对象、主要试剂、仪器 | 第18-20页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂配制方法 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 完全培养基配置 | 第20页 |
| 2.2.2 细胞复苏 | 第20-21页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第21页 |
| 2.2.4 细胞计数 | 第21页 |
| 2.2.5 细胞活性检测 | 第21页 |
| 2.2.6 细胞冻存 | 第21页 |
| 2.2.7 流式细胞仪分选SP及MP细胞 | 第21页 |
| 2.2.8 细胞周期分析 | 第21-22页 |
| 2.2.9 细胞增殖情况分析 | 第22页 |
| 2.2.10 克隆能力检测 | 第22页 |
| 2.2.11 实时荧光定量PCR(SYBR Green Real-Time PCR) | 第22-24页 |
| 2.2.12 Western Blot | 第24-27页 |
| 2.2.13 统计方法 | 第27页 |
| 3 结果 | 第27-34页 |
| 3.1 多发性骨髓瘤细胞系中存在侧群细胞 | 第27页 |
| 3.2 多发性骨髓瘤SP细胞具有肿瘤干细胞的生物学特性 | 第27-34页 |
| 3.2.1 细胞周期 | 第27-29页 |
| 3.2.2 绘制生长曲线 | 第29页 |
| 3.2.3 克隆能力检测 | 第29-30页 |
| 3.2.4 ABC家族成员表达情况 | 第30-31页 |
| 3.2.5 Real time-PCR及Western blot检测SP及MP细胞ABCG2表达情况 | 第31-32页 |
| 3.2.6 SP及MP细胞化疗药物抵抗能力检测 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-35页 |
| 5 结论 | 第35-36页 |
| 第二部分：多发性骨髓瘤中ABCG2的功能研究 | 第36-61页 |
| 1 前言 | 第36-39页 |
| 2 实验材料与方法 | 第39-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 2.1.1 实验对象 | 第39页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第39页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第39-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-44页 |
| 2.2.1 细胞培养与冻存 | 第40页 |
| 2.2.2 确定过表达ABCG2慢病毒感染NCI-H929细胞MOI值 | 第40-41页 |
| 2.2.3 慢病毒感染NCI-H929细胞过表达ABCG2感染实验 | 第41页 |
| 2.2.4 流式细胞术分析SP细胞比例 | 第41页 |
| 2.2.5 SiRNA干扰 | 第41-42页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR(SYBR Green Real-Time PCR) | 第42页 |
| 2.2.7 Western Blot | 第42-43页 |
| 2.2.8 CCK8检测细胞增殖情况 | 第43页 |
| 2.2.9 统计方法 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-57页 |
| 3.1 验证过表达慢病毒感染效率 | 第44-45页 |
| 3.1.1 倒置荧光显微镜下观察荧光效果 | 第44页 |
| 3.1.2 SYBR Green Real-Time PCR验证转染效率 | 第44-45页 |
| 3.1.3 Western blot验证转染效率 | 第45页 |
| 3.2 PTEN/PI3K/AKT信号通路调控SP细胞比例 | 第45-48页 |
| 3.2.1 LY294002或Rapamycin作用于NCI-H929细胞前后SP细胞比例 | 第45-47页 |
| 3.2.2 LY294002或Rapamycin作用于NCI-H929/ABCG2~+细胞前后SP细胞比例 | 第47-48页 |
| 3.3 ABCG2可起到保护MM细胞抵抗化疗药物杀伤的作用,而抑制PTEN/PI3K/AKT通路可抵消ABCG2的肿瘤保护作用 | 第48-50页 |
| 3.3.1 化疗药物对感染前后NCI-H929的杀伤力比较 | 第48-49页 |
| 3.3.2 化疗药物联合抑制剂LY294002或Rapamycin对感染前后NCI-H929细胞的杀伤力比较 | 第49-50页 |
| 3.4 PTEN及ABCG2 mRNA表达变化情况 | 第50-51页 |
| 3.5 NCI-H929及NCI-H929/ABCG2+经抑制剂LY294002或Rapamycin处理后相关蛋白表达变化情况 | 第51-52页 |
| 3.6 验证干扰效率 | 第52-53页 |
| 3.6.1 Real-TimePCR检测ABCG2 mRNA表达情况 | 第52页 |
| 3.6.2 Western blot方法检测SiRNA干扰前后ABCG2蛋白表达 | 第52-53页 |
| 3.7 SiRNA干扰实验前后NCI-H929细胞系SP细胞所占比例 | 第53-54页 |
| 3.8 SiRNA干扰实验前后NCI-H929细胞增殖能力检测 | 第54页 |
| 3.9 SiRNA干扰实验前后NCI-H929及NCI-H929/SiRNA对化疗药物敏感性检测 | 第54-55页 |
| 3.10 Real-Time PCR检测SiRNA干扰实验前后PTEN mRNA表达情况 | 第55-56页 |
| 3.11 Western blot方法检测SiRNA干扰下调ABCG2后PTEN/PI3K/AKT信号通路及ABCG2变化情况 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 第三部分:多发性骨髓瘤疾病中侧群细胞及相关通路的研究 | 第61-73页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-65页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第61-62页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第61-62页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第62页 |
| 2.2 实验对象和技术路线 | 第62-64页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第62-63页 |
| 2.2.2 技术路线 | 第63-64页 |
| 2.3 试验方法 | 第64-65页 |
| 2.3.1 提取骨髓单个核细胞 | 第64页 |
| 2.3.2 流式细胞术分选SP细胞 | 第64页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR | 第64页 |
| 2.3.4 Western Blot | 第64页 |
| 2.3.5 统计学方法 | 第64-65页 |
| 3 结果 | 第65-70页 |
| 3.1 MM病人骨髓单个核细胞中存在侧群细胞 | 第65页 |
| 3.2 MM病人SP细胞比例与临床信息相关性 | 第65-66页 |
| 3.3 PTEN及ABCG2 mRNA表达量在MM病人与对照组之间的区别及其与SP细胞比例的相关关系 | 第66-67页 |
| 3.4 SP细胞比例、PTEN mRNA、ABCG2 mRNA表达量在MM组间比较 | 第67-68页 |
| 3.5 MM中PTEN/PI3K/AKT通路蛋白及ABCG2蛋白表达 | 第68-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 5 结论 | 第72-73页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-85页 |
| 综述 | 第85-96页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 个人简历 | 第98页 |
