| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 研究背景 | 第12-26页 |
| 1.1 重金属污染与修复 | 第12-18页 |
| 1.1.1 重金属污染现状及危害 | 第12-14页 |
| 1.1.2 重金属污染的修复 | 第14-16页 |
| 1.1.3 微藻与重金属污染生物修复 | 第16-18页 |
| 1.2 金属离子稳态系统 | 第18-21页 |
| 1.2.1 过渡金属元素的动态平衡 | 第18-19页 |
| 1.2.2 金属离子转运蛋白 | 第19-21页 |
| 1.3 莱茵衣藻 | 第21-23页 |
| 1.3.1 莱茵衣藻简介 | 第21-22页 |
| 1.3.2 莱茵衣藻中的NRAMP蛋白家族 | 第22-23页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.5 研究内容与技术路线 | 第24-26页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第24页 |
| 1.5.2 创新性 | 第24-25页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第25-26页 |
| 第2章 NRAMP1基因及突变株的获取与鉴定 | 第26-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-29页 |
| 2.1.1 实验藻株菌株及质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 培养基与试剂 | 第26-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-49页 |
| 2.2.1 λ噬菌体制备与DNA提取 | 第29-31页 |
| 2.2.2 高GC片段扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.3 目的片段的回收 | 第32-33页 |
| 2.2.4 莱茵衣藻NRAMP1缺失突变株PCR鉴定 | 第33-36页 |
| 2.2.5 NRAMP1缺失突变株qRT-PCR鉴定 | 第36-38页 |
| 2.2.6 酵母基因组抽提 | 第38页 |
| 2.2.7 酵母中表达质粒构建 | 第38-44页 |
| 2.2.8 莱茵衣藻中表达质粒构建 | 第44-46页 |
| 2.2.9 酵母细胞核转化 | 第46-48页 |
| 2.2.10 莱茵衣藻细胞核转化 | 第48-49页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第49-56页 |
| 2.3.1 NRAMP1基因扩增与测序验证 | 第49-52页 |
| 2.3.2 NRAMP1基因缺失突变株的鉴定 | 第52-54页 |
| 2.3.3 莱茵衣藻转基因株系验证 | 第54-56页 |
| 2.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 第3章 NRAMP1生物信息学分析 | 第58-64页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第58页 |
| 3.2 实验结果与讨论 | 第58-63页 |
| 3.3 本章小结 | 第63-64页 |
| 第4章 NRAMP1蛋白功能解析 | 第64-96页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第64-65页 |
| 4.1.1 金属胁迫下莱茵衣藻生长情况测定 | 第64页 |
| 4.1.2 金属胁迫下酵母生长情况测定 | 第64-65页 |
| 4.1.3 莱茵衣藻细胞数及细胞大小测定 | 第65页 |
| 4.1.4 莱茵衣藻胞内金属离子含量测定 | 第65页 |
| 4.2 实验结果与讨论 | 第65-93页 |
| 4.2.1 初筛莱茵衣藻金属离子胁迫种类及浓度 | 第65-71页 |
| 4.2.2 NRAMP1酵母功能回复实验 | 第71-77页 |
| 4.2.3 莱茵衣藻NRAMP1蛋白转运功能解析 | 第77-93页 |
| 4.2.3.1 Cd(Ⅱ)胁迫与NRAMP1蛋白转运功能解析 | 第77-83页 |
| 4.2.3.2 Co(Ⅱ)胁迫与NRAMP1蛋白转运功能解析 | 第83-88页 |
| 4.2.3.3 Zn(Ⅱ)胁迫与NRAMP1蛋白转运功能解析 | 第88-93页 |
| 4.3 本章小结 | 第93-96页 |
| 第5章 金属转运相关蛋白家族表达分析 | 第96-104页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第96-98页 |
| 5.2 实验结果与讨论 | 第98-102页 |
| 5.2.1 NRAMP家族表达分析 | 第98-100页 |
| 5.2.2 ZIP家族表达分析 | 第100-102页 |
| 5.3 本章小结 | 第102-104页 |
| 第6章 结论与展望 | 第104-106页 |
| 6.1 结论 | 第104-105页 |
| 6.2 展望 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-118页 |
| 发表论文及参加课题 | 第118页 |
