| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章:绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 Methuselah/Methuselah-like研究现状 | 第11-16页 |
| 1.1.1 昆虫GPCRs研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.2 Mth (Mthl1)/Stunted功能和信号通路研究现状 | 第13-16页 |
| 1.2 激素对昆虫生长、发育的调控 | 第16-20页 |
| 1.2.1 保幼激素调控昆虫生长和发育 | 第16-18页 |
| 1.2.2 蜕皮激素调控昆虫生长和发育 | 第18-20页 |
| 1.3 Dusky和Dusky-like研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章:赤拟谷盗methuselah-like基因的功能研究 | 第23-46页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2.3 实验药品与试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 提取总RNA | 第23-24页 |
| 2.2.5 cDNA合成 | 第24-25页 |
| 2.2.6 mthl1～mthl5全长cDNA克隆 | 第25-28页 |
| 2.2.7 mthl1～mthl5表达模式分析 | 第28-30页 |
| 2.2.8 mthl1～mthl5的dsRNA的合成 | 第30-32页 |
| 2.2.9 mthl1～mthl5的dsRNA的注射 | 第32-33页 |
| 2.2.10 赤拟谷盗成虫寿命统计 | 第33-34页 |
| 2.2.11 赤拟谷盗产卵量和卵成活率统计 | 第34页 |
| 2.2.12 赤拟谷盗成虫应激能力检测 | 第34-35页 |
| 2.2.13 数据处理 | 第35页 |
| 2.3 结果 | 第35-43页 |
| 2.3.1 赤拟谷盗mthls基因全长cDNA的克隆 | 第35-37页 |
| 2.3.2 赤拟谷盗mthls基因的时期表达模式 | 第37页 |
| 2.3.3 mthls基因对赤拟谷盗抗饥饿能力的调控 | 第37-39页 |
| 2.3.4 mthls基因对赤拟谷盗抗高温能力的调控 | 第39页 |
| 2.3.5 mthls基因对赤拟谷盗抗氧化应激能力的调控 | 第39-40页 |
| 2.3.6 敲低mthls基因缩短了赤拟谷盗的寿命 | 第40-41页 |
| 2.3.7 敲低mthls基因影响了赤拟谷盗的发育和生殖 | 第41-42页 |
| 2.3.8 雌性个体介导mthls基因对赤拟谷盗产卵量和胚胎发育的效应 | 第42-43页 |
| 2.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第三章:赤拟谷盗mthl1(Tcmthl1)关联基因的鉴定 | 第46-63页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第46-50页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第46页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 实验药品与试剂 | 第46页 |
| 3.2.4 RNAi | 第46-47页 |
| 3.2.5 总RNA提取和测序 | 第47页 |
| 3.2.6 Reads在参考基因组和注释基因上的分布分析 | 第47页 |
| 3.2.7 基因表达量分析和差异基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.2.8 GO (Gene Ontology)功能显著性富集分析 | 第48页 |
| 3.2.9 Pathway显著性富集分析 | 第48-49页 |
| 3.2.10 qRT-PCR验证RNA-sequencing数据 | 第49-50页 |
| 3.3 结果 | 第50-58页 |
| 3.3.1 Illumina测序和比对到参考基因组 | 第50-51页 |
| 3.3.2 基因表达量分析 | 第51-53页 |
| 3.3.3 注释所有检测到的基因 | 第53页 |
| 3.3.4 DEGs的鉴定 | 第53页 |
| 3.3.5 DEGs的功能分析 | 第53-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-63页 |
| 第四章:stunted通过20E和JH信号通路调节赤拟谷盗的变态行为 | 第63-88页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料与方法 | 第63-75页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第63页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第63页 |
| 4.2.3 实验药品与试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.4 总RNA提取 | 第64页 |
| 4.2.5 cDNA合成 | 第64-65页 |
| 4.2.6 stunted全长cDNA克隆 | 第65-68页 |
| 4.2.7 stunted表达模式分析 | 第68-69页 |
| 4.2.8 dsRNA的合成 | 第69-71页 |
| 4.2.9 dsRNA的显微注射 | 第71-72页 |
| 4.2.10 RNA-sequencing | 第72-74页 |
| 4.2.11 qRT-PCR检测基因表达水平 | 第74页 |
| 4.2.12 数据处理 | 第74-75页 |
| 4.3 结果 | 第75-83页 |
| 4.3.1 赤拟谷盗stunted的鉴定、克隆和表达模式分析 | 第75-76页 |
| 4.3.2 敲低stunted阻断了赤拟谷盗幼虫生长、蜕皮和化蛹 | 第76-77页 |
| 4.3.3 沉默stunted抑制了赤拟谷盗羽化行为的启动 | 第77页 |
| 4.3.4 差异表达基因的鉴定 | 第77-80页 |
| 4.3.5 CYP18A1是赤拟谷盗蜕皮、变态必需的基因,并调节ftz-f1,E74和Br-C的表达 | 第80页 |
| 4.3.6 敲低ftz-f1影响赤拟谷盗蜕皮和变态,并降低E74,Br-C,Dib,Phm和Shd的表达 | 第80页 |
| 4.3.7 E74 RNAi导致赤拟谷盗不能化蛹和羽化 | 第80-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-88页 |
| 4.4.1 沉默赤拟谷盗stunted上调CYP18A1的表达,促进20E的26-羟基化 | 第84-85页 |
| 4.4.2 敲低stunted下调ftz-f1的水平抑制赤拟谷盗体内蜕皮激素的合成 | 第85-86页 |
| 4.4.3 stunted RNAi下调20E应答基因Br-C和E74的表达影响赤拟谷盗变态 | 第86页 |
| 4.4.4 敲低stunted上调JH信号通路关键基因Kr-h1抑制赤拟谷盗蜕皮和化蛹 | 第86-88页 |
| 第五章:Tcmthl1和stunted关联基因dusky和dusky-like的功能分析 | 第88-110页 |
| 5.1 引言 | 第88页 |
| 5.2 实验材料与方法 | 第88-95页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第88页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第88页 |
| 5.2.3 实验药品与试剂 | 第88页 |
| 5.2.4 总RNA提取 | 第88-89页 |
| 5.2.5 cDNA合成 | 第89-90页 |
| 5.2.6 dusky和dusky-like的鉴定及进化分析 | 第90页 |
| 5.2.7 dusky和dusky-like表达模式分析 | 第90-91页 |
| 5.2.8 dsRNA的合成 | 第91-94页 |
| 5.2.9 dsRNA的显微注射 | 第94页 |
| 5.2.10 qRT-PCR检测基因表达水平 | 第94-95页 |
| 5.2.11 数据处理 | 第95页 |
| 5.3 结果 | 第95-103页 |
| 5.3.1 dy和dy1的鉴定和进化分析 | 第95-97页 |
| 5.3.2 赤拟谷盗的dy和dy1发育时期表达模式 | 第97-98页 |
| 5.3.3 dy是赤拟谷盗翅膀形态发生必需的基因,而dy1对胚胎发生、化蛹、羽化和色素分散有重要的调控作用 | 第98-99页 |
| 5.3.4 敲低dy下调了wingless,svb及其靶标基因,four-jointed(fj)和ftz-f1的表达 | 第99-100页 |
| 5.3.5 沉默dy1只下调赤拟谷盗 ftz-f1的表达 | 第100-101页 |
| 5.3.6 svb是赤拟谷盗变态发育和表皮色素分散必需的基因,它可以促进miniature,singed, forked, dy1和 ftz-f1 的表达 | 第101页 |
| 5.3.7 赤拟谷盗blimp-1在变态和表皮色素分散中有重要调控作用，正调控svb及其靶标基因和Rz-f1的表达 | 第101-103页 |
| 5.4 讨论 | 第103-110页 |
| 5.4.1 赤拟谷盗forked和fj极有可能介导dy对翅膀形态发生的调控 | 第103-107页 |
| 5.4.2 dy1的表达是blimp-1通过svb来调控的,但是它却可以激活ftz-f1来影响赤拟谷盗的变态行为 | 第107-108页 |
| 5.4.3 dy,dy1和miniature在赤拟谷盗中发生了功能分化 | 第108-109页 |
| 5.4.4 Dy和 Dy1参与TcMthl1信号通路 | 第109-110页 |
| 第六章:结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 在读期间已/待发表的学术论文及研究成果 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124页 |
