缩略词 | 第4-5页 |
摘要 | 第5-7页 |
ABSTRACT | 第7-8页 |
第一章 绪论 | 第12-22页 |
1.1 毛色遗传研究现状 | 第12-13页 |
1.2 TYR基因研究现状 | 第13-16页 |
1.2.1 TYR基因的结构与功能 | 第13-14页 |
1.2.2 TYR基因与毛色关系的研究现状 | 第14-16页 |
1.3 MITF基因研究现状 | 第16-17页 |
1.3.1 MITF基因的结构和功能 | 第16页 |
1.3.2 MITF基因与毛色关系的研究现状 | 第16-17页 |
1.4 CBD103基因研究现状 | 第17-18页 |
1.4.1 CBD103基因的结构与功能 | 第17-18页 |
1.4.2 CBD103基因与毛色关系的研究现状 | 第18页 |
1.5 启动子的相关研究方法 | 第18-20页 |
1.5.1 真核生物的启动子 | 第18-19页 |
1.5.2 启动子的相关研究方法 | 第19-20页 |
1.6 转录因子结合位点的研究方法 | 第20-21页 |
1.6.1 真核生物的转录因子 | 第20页 |
1.6.2 转录因子结合位点的研究方法 | 第20-21页 |
1.7 本研究的主要内容及意义 | 第21-22页 |
1.7.1 本研究的主要内容 | 第21页 |
1.7.2 本研究的重要意义 | 第21-22页 |
第二章 材料与方法 | 第22-45页 |
2.1 材料 | 第22-27页 |
2.1.1 北极狐DNA样品 | 第22页 |
2.1.2 菌株 | 第22页 |
2.1.3 质粒(载体) | 第22-24页 |
2.1.4 细胞 | 第24页 |
2.1.5 主要试验试剂及配制 | 第24-26页 |
2.1.6 主要试验仪器设备 | 第26-27页 |
2.1.7 生物信息学分析软件 | 第27页 |
2.2 方法 | 第27-45页 |
2.2.1 北极狐基因组DNA提取 | 第27-28页 |
2.2.2 北极狐总RNA提取及反转录RNA | 第28-30页 |
2.2.3 北极狐CBD103基因引物设计 | 第30-31页 |
2.2.4 北极狐MITF-M基因引物设计 | 第31-33页 |
2.2.5 北极狐TYR基因引物设计 | 第33-34页 |
2.2.6 PCR扩增 | 第34-35页 |
2.2.7 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第35-36页 |
2.2.8 PCR产物的回收 | 第36-37页 |
2.2.9 PCR产物与克隆载体(T-VectorpMD18)连接 | 第37页 |
2.2.10 连接产物的转化 | 第37页 |
2.2.11 重组质粒的筛选 | 第37-38页 |
2.2.12 质粒的小量提取 | 第38-39页 |
2.2.13 重组质粒和pGL3-Basic质粒的双酶切及目的片段回收 | 第39页 |
2.2.14 报告基因载体的构建(pGL3-Basic-X) | 第39-40页 |
2.2.15 阳性重组载体pGL3-Basic-X的无内毒素质粒大量提取 | 第40-41页 |
2.2.16 细胞培养 | 第41-42页 |
2.2.17 细胞瞬时转染 | 第42-43页 |
2.2.18 双荧光素酶报告基因活性鉴定 | 第43-44页 |
2.2.19 数据处理 | 第44-45页 |
第三章 结果与分析 | 第45-71页 |
3.1 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因5′侧翼序列的生物信息学分析 | 第45-53页 |
3.1.1 CBD103基因5′侧翼序列的生物信息学分析 | 第45-47页 |
3.1.2 MITF-M基因5′侧翼序列的生物信息学分析 | 第47-51页 |
3.1.3 TYR基因5′侧翼序列的生物信息学分析 | 第51-53页 |
3.2 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因启动子缺失片段的扩增 | 第53-55页 |
3.2.1 CBD103基因启动子缺失片段的扩增 | 第53-54页 |
3.2.2 MITF-M基因启动子缺失片段的扩增 | 第54-55页 |
3.2.3 TYR基因启动子缺失片段的扩增 | 第55页 |
3.3 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因启动子缺失片段荧光素酶表达载体的构建 | 第55-59页 |
3.3.1 CBD103基因启动子缺失片段荧光素酶表达载体的构建 | 第55-57页 |
3.3.2 MITF-M基因启动子缺失片段荧光素酶表达载体的构建 | 第57-58页 |
3.3.3 TYR基因启动子缺失片段荧光素酶表达载体的构建 | 第58-59页 |
3.4 细胞培养 | 第59页 |
3.5 细胞转染及活性检测 | 第59-63页 |
3.5.1 最佳转染条件的摸索 | 第59-60页 |
3.5.2 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因启动子活性分析 | 第60-63页 |
3.6 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因启动子区转录因子结合位点的预测分析 | 第63-64页 |
3.7 北极狐CBD103、MITF-M和TYR基因启动子区转录因子结合位点突变体活性分析 | 第64-71页 |
3.7.1 CBD103基因启动子区转录因子结合位点突变体活性分析 | 第64-66页 |
3.7.2 MITF-M基因启动子区转录因子结合位点突变体活性分析 | 第66-68页 |
3.7.3 TYR基因启动子区转录因子结合位点突变体活性分析 | 第68-71页 |
第四章 讨论 | 第71-77页 |
4.1 实验方法讨论 | 第71-72页 |
4.2 实验结果讨论 | 第72-77页 |
4.2.1 CBD103基因启动子活性区分析 | 第72-73页 |
4.2.2 MITF-M基因启动子活性区分析 | 第73-75页 |
4.2.3 TYR基因启动子活性区分析 | 第75-77页 |
第五章 结论 | 第77-78页 |
参考文献 | 第78-84页 |
发表论文和参加科研情况说明 | 第84-85页 |
致谢 | 第85页 |