| CONTENTS | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 IB病原学 | 第13-16页 |
| 1.1.1 IBV基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2 IBV结构蛋白及生物学功能 | 第14-16页 |
| 1.2 IB流行病学 | 第16-18页 |
| 1.2.1 流行病学特点 | 第17页 |
| 1.2.2 分子流行病学特征 | 第17-18页 |
| 1.3 IB临床症状和病理变化 | 第18-19页 |
| 1.3.1 临床症状 | 第18页 |
| 1.3.2 病理变化 | 第18-19页 |
| 1.4 IB诊断技术 | 第19-21页 |
| 1.4.1 临床诊断 | 第19页 |
| 1.4.2 病毒分离 | 第19-20页 |
| 1.4.3 血清学诊断方法 | 第20-21页 |
| 1.4.4 分子生物学诊断方法 | 第21页 |
| 1.5 IB疫苗的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.6 IB的防治 | 第22-23页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-27页 |
| 2.1.1 质粒、菌株及鸡胚 | 第24页 |
| 2.1.2 病毒与血清 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第24-27页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-37页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 IBV HH06株N基因的克隆 | 第28-30页 |
| 2.2.3 IBV HH06株N蛋白原核表达与生物活性分析 | 第30-33页 |
| 2.2.4 IBV HH06株N蛋白多克隆抗体的制备及其生物活性检测 | 第33-34页 |
| 2.2.5 IBV HH06株N蛋白间接ELISA方法的建立 | 第34-35页 |
| 2.2.6 间接ELISA方法特异性试验 | 第35-36页 |
| 2.2.7 间接ELISA方法重复性试验 | 第36页 |
| 2.2.8 间接ELISA方法敏感性试验 | 第36页 |
| 2.2.9 间接ELISA方法检测临床样本 | 第36-37页 |
| 3 结果 | 第37-49页 |
| 3.1 IBV HH06株N基因的克隆与鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.1 RT-PCR扩增N基因 | 第37页 |
| 3.1.2 重组质粒pMD18-T-N的鉴定 | 第37-39页 |
| 3.1.3 pMD18-T-N序列测定及分析 | 第39页 |
| 3.2 IBV HH06株N蛋白原核表达 | 第39-43页 |
| 3.2.1 扩增目的片段N基因 | 第39-40页 |
| 3.2.2 重组质粒pET-30a-N的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 表达产物SDS-PAGE的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.4 表达产物的Western-blot鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 IBV HH06株N蛋白多克隆抗体的制备及其鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.1 多克隆抗体的间接ELISA检测和Western-blot检测 | 第43页 |
| 3.3.2 多克隆抗体的IFA检测 | 第43-44页 |
| 3.4 间接ELISA方法的建立 | 第44-49页 |
| 3.4.1 最佳抗原包被浓度及血清稀释度的确定 | 第44-45页 |
| 3.4.2 最佳封闭液的选择和时间的确定 | 第45页 |
| 3.4.3 最佳血清孵育时间的确定 | 第45页 |
| 3.4.4 HRP标记羊抗鸡IgG(二抗)最佳稀释度和时间的确定 | 第45页 |
| 3.4.5 最佳底物显色时间的确定 | 第45-47页 |
| 3.4.6 临界值确定 | 第47页 |
| 3.4.7 重复性试验 | 第47页 |
| 3.4.8 特异性试验 | 第47页 |
| 3.4.9 敏感性试验 | 第47-48页 |
| 3.4.10 临床样品检测 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 IBV HH06株N基因的克隆与序列分析 | 第49页 |
| 4.2 IBV HH06株N蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 4.2.1 pET-30a(+)表达载体的选择 | 第49页 |
| 4.2.2 重组N蛋白的表达及纯化 | 第49-50页 |
| 4.3 间接ELISA方法的建立 | 第50-53页 |
| 4.3.1 N蛋白的选择 | 第50-51页 |
| 4.3.2 间接ELISA检测方法各项条件的优化 | 第51页 |
| 4.3.3 建立间接ELISA诊断方法的特性 | 第51-53页 |
| 5 结论 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 攻读专业硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
