| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 细胞骨架的构成 | 第10-13页 |
| 1.1.1 肌动蛋白细胞骨架 | 第10页 |
| 1.1.2 肌动蛋白的组装机制 | 第10-12页 |
| 1.1.3 微丝结合蛋白(ABP) | 第12-13页 |
| 1.2 棉花CEF1基因的研究 | 第13-17页 |
| 1.2.1 棉花纤维与微丝的关系 | 第13-14页 |
| 1.2.2 棉花中CFE1基因含有DUF761家族结构域 | 第14-17页 |
| 1.3 CRISPR-CAS9基因编辑技术 | 第17-21页 |
| 1.3.1 基因编辑技术的兴起 | 第17-18页 |
| 1.3.2 CRISPR-CAS9的作用机制 | 第18-19页 |
| 1.3.3 CRISPR-CAS9在植物体的应用 | 第19-21页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株及载体 | 第22页 |
| 2.1.3 酶、药品及试剂 | 第22页 |
| 2.1.4 溶液 | 第22-23页 |
| 2.1.5 实验中所用到的引物 | 第23-26页 |
| 2.1.5.1 T-DNA插入检测的引物 | 第23页 |
| 2.1.5.2 启动子扩增引物 | 第23-25页 |
| 2.1.5.3 RT-QPCR引物 | 第25-26页 |
| 2.1.5.4 DUF761家族CDS扩增引物 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 目的DNA片段的回收 | 第26-27页 |
| 2.2.2 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第27页 |
| 2.2.3 农杆菌感受态的制备及其转化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 拟南芥RNA提取及反转录获得cDNA模板 | 第28-30页 |
| 2.2.6 农杆菌侵花法转化拟南芥 | 第30页 |
| 2.2.7 DUF761家族启动子的扩增 | 第30页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR | 第30-31页 |
| 2.2.9 蛋白的预诱导及大量诱导 | 第31-32页 |
| 2.2.10 CRISPR-CAS9载体的构建 | 第32-33页 |
| 第三章 结果与分析 | 第33-60页 |
| 3.1 DUF761家族的进化分析 | 第33-41页 |
| 3.1.1 分析61种物种中存在的DUF761家族同源基因 | 第33-36页 |
| 3.1.2 14个代表物种中的DUF761家族同源基因建树 | 第36-40页 |
| 3.1.3 拟南芥DUF761家族蛋白的同源序列比对 | 第40-41页 |
| 3.2 DUF761家族的组织定位 | 第41-48页 |
| 3.2.1 RT-QPCR检测DUF761的组织表达模式 | 第41-45页 |
| 3.2.2 GUS化学组织染色鉴定DUF761家族的组织定位 | 第45-48页 |
| 3.3 亚细胞定位表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.4 DUF761家族T-DNA插入突变体的获得 | 第50-53页 |
| 3.4.1 筛选DUF761家族T-DNA插入纯合突变体 | 第50-51页 |
| 3.4.2 DUF761-1,-5和-7 T-DNA插入纯合突变体的基因抑制情况 | 第51-53页 |
| 3.5 通过CRISPR-CAS9技术获得DUF761其他基因突变体 | 第53-55页 |
| 3.5.1 CRISPR-CAS9载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.5.2 CRISPR-CAS9构建突变体的编辑位点 | 第54-55页 |
| 3.6 DUF761家族的蛋白诱导 | 第55-60页 |
| 3.6.1 PET30A诱导载体的构建 | 第55-57页 |
| 3.6.2 PGEX4T-1诱导载体的构建 | 第57-60页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第60-63页 |
| 4.1 讨论 | 第60-62页 |
| 4.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
