| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词表及其英汉对照 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 MADS-box基因家族研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 概述 | 第12页 |
| 1.2 MADS-box基因家族的结构特征 | 第12-13页 |
| 1.3 MADS-box基因家族的功能 | 第13-20页 |
| 1.3.1 参与植物花器官发育 | 第13-15页 |
| 1.3.2 MADS-box基因家族参与种子发育过程 | 第15-16页 |
| 1.3.3 MADS-box基因家族在胚珠的发育中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.4 MADS-box基因家族与植物胚发育的基因调控 | 第17-18页 |
| 1.3.5 MADS-box调控果实成熟 | 第18页 |
| 1.3.6 MADS-box基因在种子开裂中的作用 | 第18-19页 |
| 1.3.7 MADS-box家族基因控制开花时间 | 第19-20页 |
| 1.4 大豆MADS-box基因的研究进展 | 第20页 |
| 1.5 研究展望 | 第20-21页 |
| 2 酵母双杂交技术概述 | 第21-27页 |
| 2.1 酵母双杂交技术的基本原理 | 第21-22页 |
| 2.2 应用酵母双杂交技术的优点和局限性 | 第22-23页 |
| 2.3 酵母双杂交的应用 | 第23-25页 |
| 2.3.1 在蛋白质组研究方面的应用 | 第24页 |
| 2.3.2 绘制蛋白质相互作用图谱 | 第24页 |
| 2.3.3 在细胞信号转导研究中的应用 | 第24-25页 |
| 2.4 酵母双杂交的发展及新技术应用 | 第25-27页 |
| 2.4.1 酵母双杂交技术改进 | 第25页 |
| 2.4.2 酵母双杂交系统的衍生系统 | 第25-27页 |
| 本研究的目的和意义 | 第27-28页 |
| 第二章 GmMADS28原位杂交分析 | 第28-48页 |
| 1 材料与方法 | 第29-41页 |
| 1.1 植物材料 | 第29页 |
| 1.2 仪器设备 | 第29页 |
| 1.3 主要试剂 | 第29页 |
| 1.4 实验过程 | 第29-41页 |
| 1.4.1 植物材料的固定和包埋 | 第29-31页 |
| 1.4.2 GmMADS28基因的杂交前的准备 | 第31-33页 |
| 1.4.3 RNA探针的地高辛标记 | 第33-35页 |
| 1.4.4 RNA探针的检测 | 第35页 |
| 1.4.5 原位杂交 | 第35-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-45页 |
| 2.1 GmMADS28目的片段的克隆 | 第41-42页 |
| 2.2 目的片段的鉴定结果 | 第42-43页 |
| 2.3 转录模板的线性化 | 第43-44页 |
| 2.4 RNA探针的标记和检测 | 第44页 |
| 2.5 GmMADS28 mRNA原位杂交切片分析结果 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45-48页 |
| 第三章 GmMADS28互作蛋白的筛选 | 第48-58页 |
| 1 材料与方法 | 第48-52页 |
| 1.1 菌株、质粒和试剂 | 第48页 |
| 1.2 常用培养基 | 第48页 |
| 1.3 用Gateway技术构建诱饵载体 | 第48-49页 |
| 1.3.1 Gateway技术构建pDEST-32-GmMADS28诱饵载体 | 第49页 |
| 1.4 cDNA表达文库的构建 | 第49-51页 |
| 1.4.1 BP重组反应构建入门文库 | 第49-50页 |
| 1.4.2 入门文库鉴定及序列测定 | 第50页 |
| 1.4.3 LR重组反应构建表达文库 | 第50页 |
| 1.4.4 表达文库鉴定及序列测定 | 第50-51页 |
| 1.5 酵母感受态细胞制备 | 第51页 |
| 1.6 GmMADS28诱饵载体自激活作用检测 | 第51页 |
| 1.7 互作蛋白cDNA文库筛选 | 第51页 |
| 1.8 一对一阳性验证(回转酵母验证) | 第51-52页 |
| 1.9 酵母双杂交阳性克隆的鉴定 | 第52页 |
| 1.10 阳性克隆的测序比对分析 | 第52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-56页 |
| 2.1 GmMADS28诱饵载体自激活作用检测 | 第52-53页 |
| 2.2 一对一阳性验证(酵母回转验证) | 第53-54页 |
| 2.2.1 酵母质粒转化大肠杆菌验证 | 第53-54页 |
| 2.2.2 回转酵母验证 | 第54页 |
| 2.3 β-半乳糖苷酶印膜法检测lacZ报告基因的表达 | 第54-55页 |
| 2.4 GmMADS28△C互作蛋白的测序分析结果 | 第55-56页 |
| 3 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 GmMADS28过表达载体和RNAi干涉载体的构建 | 第58-72页 |
| 1 材料与方法 | 第58-65页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第58-59页 |
| 1.2 主要试剂及仪器设备 | 第59页 |
| 1.3 试验方法步骤 | 第59-65页 |
| 1.3.1 GmMADS28基因cDNA克隆 | 第59-60页 |
| 1.3.2 PCR扩增产物的回收、克隆及测序 | 第60页 |
| 1.3.3 利用gateway技术构建过量表达载体 | 第60-63页 |
| 1.3.4 重组质粒转化根癌农杆菌 | 第63页 |
| 1.3.5 利用gateway技术构建RNAi干涉载体 | 第63-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-70页 |
| 2.1 GmMADS28全长cDNA的克隆 | 第65页 |
| 2.2 PCR产物扩增与测序 | 第65-66页 |
| 2.3 Gateway体系构建植物过表达载体 | 第66-67页 |
| 2.4 植物过表达载体转化根癌农杆菌的检测 | 第67-68页 |
| 2.5 GmMADS28干涉片段的克隆 | 第68页 |
| 2.6 利用gateway技术构建RNAi干涉载体 | 第68-69页 |
| 2.7 植物干扰表达载体转化根癌农杆菌的检测 | 第69-70页 |
| 3 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化 | 第72-84页 |
| 1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 1.1 植物材料 | 第72页 |
| 1.2 菌株和载体 | 第72-73页 |
| 1.3 主要仪器和试剂 | 第73页 |
| 1.4 农杆菌介导的大豆的子叶节的遗传转化 | 第73-75页 |
| 1.4.1 大豆的萌发 | 第73页 |
| 1.4.2 农杆菌的培养 | 第73页 |
| 1.4.3 菌体的收集和菌液准备 | 第73页 |
| 1.4.4 子叶节外植体与农杆菌共培养 | 第73-74页 |
| 1.4.5 丛生芽诱导 | 第74页 |
| 1.4.6 丛生芽伸长 | 第74页 |
| 1.4.7 生根和移栽 | 第74-75页 |
| 1.4.8 转化植株的种子收获 | 第75页 |
| 1.5 影响遗传转化的因素 | 第75页 |
| 1.5.1 灭菌时间对大豆灭菌的效果 | 第75页 |
| 1.5.2 灭菌时间对大豆种子萌发的影响 | 第75页 |
| 1.5.3 不同大豆品种对潮霉素的敏感性研究 | 第75页 |
| 1.5.4 不同大豆材料综合组培性状的比较 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-82页 |
| 2.1 大豆的转化及再生 | 第75-76页 |
| 2.2 遗传转化获得抗性苗的表型观察 | 第76-79页 |
| 2.2.1 过表达载体的转化大豆子叶节 | 第76-78页 |
| 2.2.2 RNAi干涉载体的转化大豆子叶节 | 第78-79页 |
| 2.3 影响遗传转化的因素的探究 | 第79-82页 |
| 2.3.1 灭菌时间对大豆灭菌的效果 | 第79-80页 |
| 2.3.2 灭菌时间对大豆种子萌发的影响 | 第80-81页 |
| 2.3.3 不同大豆品材料综合组培性状的比较 | 第81-82页 |
| 3 讨论 | 第82-84页 |
| 全文结论 | 第84-86页 |
| 本研究创新之处 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-96页 |
| 附录 | 第96-104页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
