| 中文摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 縮略语表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 第一部分 重组人IL-35的构建及其表达 | 第14-26页 |
| 一、实验材料 | 第14-17页 |
| 1. 试剂 | 第14页 |
| 2. 生物材料 | 第14页 |
| 3. 器材 | 第14页 |
| 4. 溶液配置 | 第14-17页 |
| 二、实验方法 | 第17-22页 |
| 1. 质粒DNA的提取 | 第17页 |
| 2. 重组人IL-35载体的构建 | 第17-20页 |
| 2.1 PCR扩增人IL-12p35和EBI3基因 | 第17-18页 |
| 2.2 pSTEP2-IL35-LFc质粒的构建 | 第18页 |
| 2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第18页 |
| 2.4 DNA的酶切 | 第18-19页 |
| 2.5 感受态菌的制备 | 第19页 |
| 2.6 质粒的转化 | 第19页 |
| 2.7 克隆的筛选与鉴定 | 第19-20页 |
| 3. pSTEP2-IL35-LFc载体的转染及表达 | 第20页 |
| 4. 重组人IL-35的纯化 | 第20页 |
| 5. 重组人IL-35的鉴定 | 第20-22页 |
| 5.1 IL-35-IgG1(Fc)的SDS-PAGE电泳 | 第20-21页 |
| 5.2 IL-35-IgG1(Fc)去糖基化及鉴定 | 第21页 |
| 5.3 Western Blot鉴定 | 第21-22页 |
| 三、实验结果 | 第22-24页 |
| 1. EBI3、IL-12p35基因PCR扩增结果以及载体的获得 | 第22-23页 |
| 2. 重组人IL-35的鉴定结果 | 第23-24页 |
| 2.1 IL-35-IgG1(Fc)的SDS-PAGE电泳结果 | 第23页 |
| 2.2 IL-35-IgG1(Fc)的免疫印记鉴定结果 | 第23-24页 |
| 四、讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 重组人IL-35的生物活性检测 | 第26-34页 |
| 一、实验材料 | 第26-27页 |
| 1. 主要试剂 | 第26页 |
| 2. 细胞 | 第26页 |
| 3. 仪器 | 第26页 |
| 4. 溶液配制 | 第26-27页 |
| 二、实验方法 | 第27-29页 |
| 1. rhIL-35与gp130的结合作用 | 第27-28页 |
| 1.1 gp130的生物素化 | 第27页 |
| 1.2 酶联免疫法(ELISA) | 第27-28页 |
| 2. rhIL-35对gp130的中和作用 | 第28页 |
| 2.1 细胞培养 | 第28页 |
| 2.2 rhIL-35对M1细胞的作用 | 第28页 |
| 2.3 rhIL-35对gp130中和活性的检测 | 第28页 |
| 3. rhIL-35对gp130的中和作用 | 第28-29页 |
| 3.1 细胞培养 | 第28页 |
| 3.2 rhIL-35对LIF中和活性的检测 | 第28-29页 |
| 三、实验结果 | 第29-31页 |
| 1. rhIL-35与gp130的结合作用 | 第29页 |
| 2. rhIL-35对M1细胞的作用 | 第29-30页 |
| 3. rhIL-35对gp130中和活性 | 第30-31页 |
| 4. rhIL-35对LIF的拮抗作用 | 第31页 |
| 四、讨论 | 第31-34页 |
| 第三部分 重组人IL-35对T细胞的作用 | 第34-44页 |
| 一、实验材料 | 第34页 |
| 1. 试剂 | 第34页 |
| 2. 实验动物 | 第34页 |
| 3. 仪器 | 第34页 |
| 4. 溶液配置 | 第34页 |
| 二、实验方法 | 第34-36页 |
| 1. rhIL-35对活化T细胞的作用 | 第34-35页 |
| 1.1 小鼠脾细胞及胸腺细胞的分离 | 第34-35页 |
| 1.2 rhIL-35对活化T淋巴细胞作用效果的检测 | 第35页 |
| 2. rhIL-35对CD4~+T细胞及CD4~+CD25~+T细胞的作用 | 第35-36页 |
| 2.1 细胞处理 | 第35页 |
| 2.2 细胞流式检测 | 第35-36页 |
| 3. rhIL-35对PBMC的作用 | 第36页 |
| 3.1 PBMC的分离 | 第36页 |
| 3.2 rhIL-35对PBMC的作用 | 第36页 |
| 三、实验结果 | 第36-40页 |
| 1. rhIL-35对活化的T细胞的作用结果 | 第36-37页 |
| 2. rhIL-35对CD4~+T及CIM~+CD25~+T细胞的作用结果 | 第37-40页 |
| 3. rhIL-35对PBMC的作用结果 | 第40页 |
| 四、讨论 | 第40-42页 |
| 1. rhIL-35对活化的T淋巴细胞的作用 | 第41页 |
| 2. rhIL-35对CD4~+T及CD4~+CD25~+T细胞的作用 | 第41-42页 |
| 3. rhIL-35对PBMC的作用 | 第42页 |
| 五、小结 | 第42-44页 |
| 总结 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 综述 IL-12家族各成员及其受体的研究进展 | 第48-60页 |
| 一、IL-12家族各成员及其受体组成 | 第48-49页 |
| 二、IL-12及其受体 | 第49-52页 |
| 1. IL-12的分子结构 | 第49-50页 |
| 2. IL-12的受体 | 第50页 |
| 3. IL-12的生物学功能 | 第50-51页 |
| 3.1 IL-12诱导其他细胞因子产生 | 第50-51页 |
| 3.2 IL-23调节T细胞功能 | 第51页 |
| 4. IL-12的临床应用前景 | 第51-52页 |
| 三、IL-23及其受体 | 第52-54页 |
| 1. IL-23的分子结构 | 第52页 |
| 2. IL-23的受体 | 第52-53页 |
| 3. IL-23的生物学功能 | 第53-54页 |
| 3.3 IL-23是炎症应答的重要细胞因子 | 第53页 |
| 3.4 IL-23促进记忆T细胞的增殖 | 第53页 |
| 3.5 IL-23作用于树突状细胞(DC) | 第53-54页 |
| 4. IL-23的临床应用前景 | 第54页 |
| 四、IL-27及其受体 | 第54-56页 |
| 1. IL-27的分子结构 | 第54页 |
| 2. IL-27的受体 | 第54-55页 |
| 3. IL-27的生物学功能 | 第55页 |
| 4. IL-27的临床应用前景 | 第55-56页 |
| 五、IL-35及其受体 | 第56-59页 |
| 1. IL-35的分子结构 | 第56页 |
| 2. IL-35的受体 | 第56-57页 |
| 3. IL-35的生物学功能 | 第57-58页 |
| 3.1 IL-35对T细胞的作用 | 第57页 |
| 3.2 IL-35可以缓解CIA | 第57-58页 |
| 4. IL-35的临床应用前景 | 第58-59页 |
| 六、展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
