缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-12页 |
Abstract | 第12-15页 |
前言 | 第16-17页 |
文献回顾 | 第17-28页 |
1 材料 | 第28-30页 |
1.1 实验主要试剂 | 第28-29页 |
1.2 实验主要仪器 | 第29-30页 |
2 方法 | 第30-48页 |
2.1 溶液配制 | 第30-34页 |
2.1.2 BSA 溶液的配制 | 第30页 |
2.1.3 带双抗 DMEM 培养液的配制 | 第30页 |
2.1.4 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制 | 第30-31页 |
2.1.5 胰蛋白酶消化液的配制 | 第31页 |
2.1.6 0.1%DEPC 水的配制 | 第31页 |
2.1.7 75%乙醇的配制 | 第31页 |
2.1.8 1.0M Tris·HCl 的配制 | 第31页 |
2.1.9 10mM PMSF 的配制 | 第31页 |
2.1.10 10%SDS 的配制 | 第31-32页 |
2.1.11 AP 的配制 | 第32页 |
2.1.12 AB 的配制 | 第32页 |
2.1.13 PMSF 的配制 | 第32页 |
2.1.14 还原型 5X 上样缓冲液的配制 | 第32-33页 |
2.1.15 电泳液缓冲液的配制 | 第33页 |
2.1.16 转膜缓冲液的配制 | 第33页 |
2.1.17 TBS 缓冲液的配制 | 第33页 |
2.1.18 10X 丽春红染液的配制 | 第33-34页 |
2.2 乳鼠心肌细胞的分离与培养 | 第34-36页 |
2.2.1 胶原酶 I 的配制 | 第34页 |
2.2.2 取材并分离心肌细胞 | 第34-35页 |
2.2.3 差速贴壁 | 第35-36页 |
2.2.3.1 正常铺板 | 第35-36页 |
2.2.3.2 细胞爬片 | 第36页 |
2.2.4 换液 | 第36页 |
2.3 WESTERN | 第36-39页 |
2.3.1 细胞总蛋白的提取蛋白样品制备 | 第36页 |
2.3.2 绘制 BCA 蛋白测定试剂盒标准曲线及蛋白含量测定 | 第36-37页 |
2.3.3 蛋白样品制备 | 第37页 |
2.3.4 SDS-PAGE 电泳 | 第37-38页 |
2.3.5 转膜 | 第38页 |
2.3.6 免疫反应 | 第38-39页 |
2.3.7 化学发光,显影,拍照 | 第39页 |
2.4 细胞电镜标本处理 | 第39-40页 |
2.5 PCR | 第40-44页 |
2.5.1 细胞总 RNA 的提取 | 第40页 |
2.5.2 反转录实验 | 第40-41页 |
2.5.3 基因组和线粒体 DNA 提取(QIAamp DNA mini kit) | 第41-42页 |
2.5.3.1 准备工作及注意事项 | 第41页 |
2.5.3.2 提取步骤(细胞) | 第41-42页 |
2.5.4 Real-time PCR | 第42-44页 |
2.5.4.1 引物序列 | 第42-43页 |
2.5.4.2 反应体系(康为试剂) | 第43页 |
2.5.4.3 反应方案 | 第43-44页 |
2.6 siRNA 转染实验 | 第44-45页 |
2.6.1 引物序列 | 第44页 |
2.6.2 准备工作 | 第44页 |
2.6.3 实验步骤 | 第44-45页 |
2.7 线粒体膜电位及其功能的检测 | 第45页 |
2.7.1 JC-1 染色工作液的配制 | 第45页 |
2.7.2 阴性对照设置 | 第45页 |
2.7.3 贴壁细胞处理 | 第45页 |
2.8 缺氧复氧试验 | 第45-46页 |
2.9 ATP 检测实验 | 第46页 |
2.10 心肌细胞凋亡的检测 | 第46-48页 |
2.10.1 Caspase-3 的检测 | 第46-47页 |
2.10.2 TUNEL 的检测 | 第47-48页 |
2.10.2.1 前期处理 | 第47页 |
2.10.2.2 实验步骤 | 第47页 |
2.10.2.3 注意事项 | 第47-48页 |
2.11 统计学处理 | 第48页 |
3 结果 | 第48-56页 |
3.1 心肌细胞的形态学观察 | 第48-49页 |
3.2 高糖高脂导致心肌细胞线粒体生物合成降低及线粒体结构损伤 | 第49-50页 |
3.3 脂联素逆转高糖高脂诱导的心肌细胞线粒体生物合成和功能下降 | 第50-52页 |
3.4 高糖高脂情况下,脂联素通过 PGC-1α提高心肌细胞线粒体生物合成与功能 | 第52-54页 |
3.5 脂联素通过 PGC-1α减轻高糖高脂诱导的心肌细胞缺氧复氧损伤 | 第54-56页 |
4 讨论 | 第56-59页 |
小结 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-68页 |
个人简历和研究成果 | 第68-69页 |
致谢 | 第69页 |