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脂联素通过增强PGC-1α介导的线粒体生物合成减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤

缩略语表第6-8页
中文摘要第8-12页
Abstract第12-15页
前言第16-17页
文献回顾第17-28页
1 材料第28-30页
    1.1 实验主要试剂第28-29页
    1.2 实验主要仪器第29-30页
2 方法第30-48页
    2.1 溶液配制第30-34页
        2.1.2 BSA 溶液的配制第30页
        2.1.3 带双抗 DMEM 培养液的配制第30页
        2.1.4 磷酸盐缓冲液(PBS)的配制第30-31页
        2.1.5 胰蛋白酶消化液的配制第31页
        2.1.6 0.1%DEPC 水的配制第31页
        2.1.7 75%乙醇的配制第31页
        2.1.8 1.0M Tris·HCl 的配制第31页
        2.1.9 10mM PMSF 的配制第31页
        2.1.10 10%SDS 的配制第31-32页
        2.1.11 AP 的配制第32页
        2.1.12 AB 的配制第32页
        2.1.13 PMSF 的配制第32页
        2.1.14 还原型 5X 上样缓冲液的配制第32-33页
        2.1.15 电泳液缓冲液的配制第33页
        2.1.16 转膜缓冲液的配制第33页
        2.1.17 TBS 缓冲液的配制第33页
        2.1.18 10X 丽春红染液的配制第33-34页
    2.2 乳鼠心肌细胞的分离与培养第34-36页
        2.2.1 胶原酶 I 的配制第34页
        2.2.2 取材并分离心肌细胞第34-35页
        2.2.3 差速贴壁第35-36页
            2.2.3.1 正常铺板第35-36页
            2.2.3.2 细胞爬片第36页
        2.2.4 换液第36页
    2.3 WESTERN第36-39页
        2.3.1 细胞总蛋白的提取蛋白样品制备第36页
        2.3.2 绘制 BCA 蛋白测定试剂盒标准曲线及蛋白含量测定第36-37页
        2.3.3 蛋白样品制备第37页
        2.3.4 SDS-PAGE 电泳第37-38页
        2.3.5 转膜第38页
        2.3.6 免疫反应第38-39页
        2.3.7 化学发光,显影,拍照第39页
    2.4 细胞电镜标本处理第39-40页
    2.5 PCR第40-44页
        2.5.1 细胞总 RNA 的提取第40页
        2.5.2 反转录实验第40-41页
        2.5.3 基因组和线粒体 DNA 提取(QIAamp DNA mini kit)第41-42页
            2.5.3.1 准备工作及注意事项第41页
            2.5.3.2 提取步骤(细胞)第41-42页
        2.5.4 Real-time PCR第42-44页
            2.5.4.1 引物序列第42-43页
            2.5.4.2 反应体系(康为试剂)第43页
            2.5.4.3 反应方案第43-44页
    2.6 siRNA 转染实验第44-45页
        2.6.1 引物序列第44页
        2.6.2 准备工作第44页
        2.6.3 实验步骤第44-45页
    2.7 线粒体膜电位及其功能的检测第45页
        2.7.1 JC-1 染色工作液的配制第45页
        2.7.2 阴性对照设置第45页
        2.7.3 贴壁细胞处理第45页
    2.8 缺氧复氧试验第45-46页
    2.9 ATP 检测实验第46页
    2.10 心肌细胞凋亡的检测第46-48页
        2.10.1 Caspase-3 的检测第46-47页
        2.10.2 TUNEL 的检测第47-48页
            2.10.2.1 前期处理第47页
            2.10.2.2 实验步骤第47页
            2.10.2.3 注意事项第47-48页
    2.11 统计学处理第48页
3 结果第48-56页
    3.1 心肌细胞的形态学观察第48-49页
    3.2 高糖高脂导致心肌细胞线粒体生物合成降低及线粒体结构损伤第49-50页
    3.3 脂联素逆转高糖高脂诱导的心肌细胞线粒体生物合成和功能下降第50-52页
    3.4 高糖高脂情况下,脂联素通过 PGC-1α提高心肌细胞线粒体生物合成与功能第52-54页
    3.5 脂联素通过 PGC-1α减轻高糖高脂诱导的心肌细胞缺氧复氧损伤第54-56页
4 讨论第56-59页
小结第59-60页
参考文献第60-68页
个人简历和研究成果第68-69页
致谢第69页

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