| 缩略词列表 | 第16-20页 |
| 摘要 | 第20-22页 |
| Abstract | 第22-23页 |
| 导言：肿瘤作为一种体细胞遗传病 | 第25-30页 |
| 参考文献 | 第28-30页 |
| 第一章 利用piggyBac转座子介导的插入突变在Bim缺失小鼠体内筛选肿瘤抑制基因 | 第30-78页 |
| 1.1 前言 | 第30-43页 |
| 1.1.1 高通量肿瘤基因筛选 | 第30-31页 |
| 1.1.1.1 利用临床标本筛选肿瘤相关基因 | 第30页 |
| 1.1.1.2 利用动物模型筛选肿瘤相关基因 | 第30-31页 |
| 1.1.2 插入突变系统的应用 | 第31-37页 |
| 1.1.2.1 逆转录病毒介导的插入突变 | 第33页 |
| 1.1.2.2 慢病毒介导的插入突变 | 第33-34页 |
| 1.1.2.3 转座子介导的插入突变 | 第34-37页 |
| 1.1.3 实现纯合突变的技术方法 | 第37-41页 |
| 1.1.3.1 以Blm缺陷促进杂合子缺失 | 第37-38页 |
| 1.1.3.2 通过RNA干扰技术进行基因敲低 | 第38-39页 |
| 1.1.3.3 利用基因组编辑技术实现纯合突变 | 第39-41页 |
| 1.1.4 实验目的及技术路线 | 第41-43页 |
| 1.2 材料和方法 | 第43-55页 |
| 1.2.1 生物化学药品及试剂 | 第43-44页 |
| 1.2.2 核酸分子材料 | 第44-48页 |
| 1.2.2.1 引物序列 | 第44-46页 |
| 1.2.2.2 质粒构建 | 第46-48页 |
| 1.2.3 小鼠及饲养条件 | 第48页 |
| 1.2.4 基因组DNA提取 | 第48页 |
| 1.2.5 鉴定小鼠基因型 | 第48-49页 |
| 1.2.6 鉴定PB转座子拷贝数 | 第49-50页 |
| 1.2.7 放射线同位素标记Southern印迹杂交 | 第50-52页 |
| 1.2.8 肿瘤标本收集和处理 | 第52页 |
| 1.2.9 利用SP-PCR及T载体克隆 | 第52-54页 |
| 1.2.10 二代测序靶向序列建库 | 第54-55页 |
| 1.3 结果 | 第55-67页 |
| 1.3.1 各株系转基因小鼠的建立和传代 | 第55页 |
| 1.3.2 转基因小鼠中转座子的位置及拷贝数 | 第55-57页 |
| 1.3.3 PB转座子可以在小鼠体内发生转座 | 第57-59页 |
| 1.3.4 转座发生导致小鼠胚胎发育和早期生长异常 | 第59-60页 |
| 1.3.5 转座导致小鼠生存周期缩短且诱导肿瘤发生 | 第60-62页 |
| 1.3.6 利用SP-PCR联合Sanger测序克隆整合位点 | 第62-64页 |
| 1.3.7 定向扩增建库联合二代测序可见富集插入位点 | 第64-66页 |
| 1.3.8 利用转座子作为标签评估肿瘤细胞来源 | 第66-67页 |
| 1.4 结论和讨论 | 第67-71页 |
| 1.4.1 转座可以引起小鼠生长发育异常 | 第67页 |
| 1.4.2 转座影响小鼠生存能力并促进肿瘤生长 | 第67-68页 |
| 1.4.3 在肿瘤标本中转座子整合位点存在明显的富集 | 第68页 |
| 1.4.4 利用二代测序技术增加插入位点数 | 第68页 |
| 1.4.5 富集位点中基因的大概功能 | 第68-69页 |
| 1.4.6 存在的问题及未来工作 | 第69-71页 |
| 1.5 参考文献 | 第71-78页 |
| 第二章 肝细胞特异的Cdk5rap3敲除促进小鼠DEN诱导的肝细胞癌发生发展 | 第78-108页 |
| 2.1 前言 | 第78-88页 |
| 2.1.1 基因敲除小鼠的发展及应用 | 第78-82页 |
| 2.1.1.1 组成性基因敲除小鼠 | 第78-80页 |
| 2.1.1.2 条件性基因敲除小鼠 | 第80-81页 |
| 2.1.1.3 基因敲除小鼠资源库 | 第81-82页 |
| 2.1.2 肝细胞癌的发生发展 | 第82-84页 |
| 2.1.2.1 肝细胞癌的分子和病理机制 | 第82-83页 |
| 2.1.2.2 Xbp1与HCC的潜在联系 | 第83-84页 |
| 2.1.2.3 肝细胞癌研究中的动物模型 | 第84页 |
| 2.1.3 CDK5RAP3的功能研究现状 | 第84-85页 |
| 2.1.3.1 关于CDK5RAP3的简介 | 第84-85页 |
| 2.1.3.2 CDK5RAP3对肿瘤发生发展的作用 | 第85页 |
| 2.1.4 实验背景及关注问题 | 第85-88页 |
| 2.2 材料和方法 | 第88-93页 |
| 2.2.1 生物化学药品及试剂 | 第88-89页 |
| 2.2.2 核酸分子材料 | 第89页 |
| 2.2.3 小鼠来源及饲养条件 | 第89-90页 |
| 2.2.4 DEN化学诱导小鼠肝癌发生 | 第90页 |
| 2.2.5 蛋白免疫印迹 | 第90-91页 |
| 2.2.6 免疫组织化学实验 | 第91-93页 |
| 2.3 结果 | 第93-101页 |
| 2.3.1 条件性Cdk5rap3敲除小鼠的建立 | 第93页 |
| 2.3.2 肝细胞特异Cdk5rap3敲除小鼠及效率鉴定 | 第93-95页 |
| 2.3.3 部分肝细胞Cdk5rap3缺失促进小鼠肝癌发生 | 第95-99页 |
| 2.3.4 肝癌细胞中Cdk5rap3基因表达上调 | 第99-100页 |
| 2.3.5 Cdk5rap3缺失导肝脏致自发性结节的产生 | 第100-101页 |
| 2.4 结论和讨论 | 第101-104页 |
| 2.4.1 基因重组效率比已有报道明显较低 | 第101页 |
| 2.4.2 Cdk5rap3缺失促进小鼠HCC发生 | 第101-102页 |
| 2.4.3 未来研究计划 | 第102-104页 |
| 2.5 参考文献 | 第104-108页 |
| 第三章 发现并验证基因敲入小鼠模型中与Flt3-ITD突变连锁的耐药单核苷酸变异 | 第108-154页 |
| 3.1 前言 | 第108-120页 |
| 3.1.1 AML的分子生物学基础 | 第108-111页 |
| 3.1.1.1 血液系统研究工具的发展 | 第108-109页 |
| 3.1.1.2 血液肿瘤基因的功能分类 | 第109-111页 |
| 3.1.2 FLT3在AML中的作用机制 | 第111-114页 |
| 3.1.2.1 FLT3在正常造血过程的作用 | 第111-113页 |
| 3.1.2.2 FLT3突变在血液肿瘤中的作用 | 第113-114页 |
| 3.1.3 TKI治疗和耐药的分子机制 | 第114-115页 |
| 3.1.4 针对FLT3突变的靶向治疗 | 第115-117页 |
| 3.1.4.1 第一代FLT3酪氨酸激酶抑制剂的发展 | 第115-116页 |
| 3.1.4.2 第二代FLT3酪氨酸激酶抑制剂的发展 | 第116页 |
| 3.1.4.3 Ponatinib用于克服耐药突变 | 第116-117页 |
| 3.1.5 Flt3突变小鼠模型的发展及应用 | 第117-118页 |
| 3.1.5.1 FLT3-ITD突变转基因小鼠的建立 | 第117页 |
| 3.1.5.2 FLT3突变基因敲入小鼠的建立 | 第117-118页 |
| 3.1.5.3 基因突变协同作用小鼠模型的研究 | 第118页 |
| 3.1.6 本实验关注焦点及思路 | 第118-120页 |
| 3.2 材料和方法 | 第120-134页 |
| 3.2.1 生物化学药物和试剂 | 第120-122页 |
| 3.2.2 核酸分子材料 | 第122-123页 |
| 3.2.3 细胞系及培养方法 | 第123-124页 |
| 3.2.4 小鼠模型及饲养条件 | 第124页 |
| 3.2.5 基因组DNA提取 | 第124页 |
| 3.2.6 小鼠基因型鉴定方法 | 第124-125页 |
| 3.2.7 全外显子组测序及数据分析 | 第125-126页 |
| 3.2.8 利用MiSeq进行Amplicon Assay | 第126页 |
| 3.2.9 小鼠原代白血病细胞系的建立 | 第126-127页 |
| 3.2.10 质粒构建 | 第127-130页 |
| 3.2.10.1 Flt3-ITD c.2076T>A序列及质粒构建 | 第127-128页 |
| 3.2.10.2 E.coli转化和质粒提取 | 第128-129页 |
| 3.2.10.3 Flt3-ITD c.2076T质粒构建 | 第129-130页 |
| 3.2.11 逆转录病毒包装 | 第130页 |
| 3.2.12 病毒转导及分选纯化Ba/F3细胞系 | 第130-131页 |
| 3.2.13 Ba/F3细胞系生存能力 | 第131页 |
| 3.2.14 各Ba/F3细胞系增殖能力分析 | 第131页 |
| 3.2.15 Fluorescence Resonance Energy Transfer | 第131-132页 |
| 3.2.16 STAT5磷酸化分析及蛋白免疫印迹 | 第132-133页 |
| 3.2.17 药物处理及生存状态分析 | 第133-134页 |
| 3.3 结果 | 第134-143页 |
| 3.3.1 小鼠白血病细胞Flt3基因外显子中含有SNV | 第134-135页 |
| 3.3.2 Flt3 c.2076T>A与ITD变异相互连锁 | 第135-137页 |
| 3.3.3 小鼠Flt3-ITD p.F692L等同人类FLT3-ITD p.F691L耐药突变 | 第137-138页 |
| 3.3.4 小鼠原代白血病细胞系对特异性TKI靶向药物出现耐药 | 第138-139页 |
| 3.3.5 Flt3-ITD p.F692L和Flt3-ITD p.F692F均可转化Ba/F3细胞 | 第139-142页 |
| 3.3.6 逆转Flt3-ITD p.F692L使Ba/F3细胞对靶向药物重获敏感 | 第142-143页 |
| 3.4 结论和讨论 | 第143-145页 |
| 3.4.1 Flt3-ITD小鼠模型中携带Gate-keeper耐药突变 | 第143页 |
| 3.4.2 该SNV耐药突变产生的起始原因 | 第143页 |
| 3.4.3 需谨慎解读利用该模型实验结果 | 第143-145页 |
| 3.5 参考文献 | 第145-154页 |
| 文献综述 肝细胞癌研究中的小鼠模型及应用 | 第154-162页 |
| 参考文献 | 第159-162页 |
| 附录一：转座子小鼠体内发现肿瘤的列表 | 第162-163页 |
| 附录二：转座子小鼠体内发现肿瘤的大体形态及组织病理 | 第163-172页 |
| 附录三：DEN诱发小鼠HCC八个月后的生存状态 | 第172-173页 |
| 附录四：DEN诱发小鼠HCC八个月后的形态和病理 | 第173-179页 |
| 附录五：DEN诱发小鼠HCC长期生存状态 | 第179-180页 |
| 附录六：DEN诱发小鼠HCC长期观察后肝脏的形态和病理 | 第180-182页 |
| 附录七：Cdk5rap3基因敲除小鼠长期自然生存肝脏结节发生情况 | 第182-183页 |
| 附录八：Cdk5rap3基因敲除小鼠肝脏自发结节大体形态和病理 | 第183-188页 |
| 致谢 | 第188-191页 |
| 后记 | 第191-192页 |
| 个人简历 | 第192-195页 |
