摘要 | 第3-6页 |
ABSTRACT | 第6-9页 |
中英文缩略词表 | 第13-15页 |
前言 | 第15-17页 |
第1章 FAT10和survivin在膀胱癌中的表达及其临床意义 | 第17-41页 |
引言 | 第17页 |
材料和方法 | 第17-30页 |
1.材料 | 第17-22页 |
2.免疫组化 | 第22-23页 |
3.HE染色 | 第23-24页 |
4.细胞培养 | 第24-25页 |
5.蛋白免疫印迹反应(Western blot) | 第25-28页 |
6.RNA的提取及实时荧光定量PCR | 第28-29页 |
7.数据分析及统计方法 | 第29-30页 |
结果 | 第30-38页 |
1.FAT10和survivin在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达情况 | 第30-33页 |
2.FAT10和survivin基因在膀胱癌组织中表达的关联性分析 | 第33-34页 |
3.四株膀胱癌细胞和正常细胞株人输尿管上皮永生化细胞SV-HUC-1 中FAT10和survivin的表达情况 | 第34页 |
4.FAT10和survivin在膀胱癌中的表达与临床病理特征的关联 | 第34-35页 |
5.膀胱癌患者FAT10和survivin的不同表达特征对生存时间的影响 | 第35-38页 |
6.影响生存时间的多因素Cox回归分析 | 第38页 |
讨论 | 第38-40页 |
结论 | 第40-41页 |
第2章 FAT10调控survivin对膀胱癌增殖的影响 | 第41-73页 |
引言 | 第41页 |
第一节 体外和体内实验观察干扰和过表达FAT10对survivin表达及膀胱癌增殖能力的影响 | 第41-63页 |
材料与方法 | 第41-57页 |
1.材料 | 第41-45页 |
2.细胞培养 | 第45页 |
3.蛋白免疫印迹反应(Western blot) | 第45-46页 |
4.实时荧光定量PCR | 第46页 |
5.FAT10干扰质粒的筛选 | 第46-51页 |
6.pcDNA3.1(-)myc-His FAT10重组质粒的构建 | 第51-54页 |
7.EdU实验 | 第54-55页 |
8.膀胱癌稳转细胞系构建 | 第55-56页 |
9.动物实验 | 第56页 |
10.数据分析及统计方法 | 第56-57页 |
结果 | 第57-63页 |
1.筛选最佳FAT10干扰质粒 | 第57页 |
2.pcDNA3.1(-)myc-His FAT10质粒的表达 | 第57-58页 |
3.观察降低膀胱癌细胞5637中FAT10的表达对膀胱癌细胞增殖的影响 | 第58-59页 |
4.观察过表达膀胱癌细胞UM-UC-3 中FAT10的表达对膀胱癌细胞增殖的影响 | 第59-60页 |
5.体内实验证实干扰FAT10对膀胱癌细胞增殖能力的影响 | 第60-63页 |
第2节 Survivin是FAT10调节膀胱癌细胞增殖的关键效应分子 | 第63-71页 |
材料与方法 | 第63-67页 |
1.材料 | 第63-64页 |
2.细胞培养 | 第64页 |
3.Survivin干扰质粒的筛选 | 第64-66页 |
4.GV141-Survivin重组质粒的构建 | 第66-67页 |
5.实时荧光定量PCR | 第67页 |
6.蛋白免疫印迹反应(Western blot) | 第67页 |
7.EdU实验 | 第67页 |
8.数据分析及统计方法 | 第67页 |
结果 | 第67-71页 |
1.筛选出survivin最佳干扰质粒 | 第67-68页 |
2.GV141-Survivin质粒的表达 | 第68页 |
3. FAT10调节膀胱癌细胞的增殖依赖于survivin | 第68-71页 |
讨论 | 第71-72页 |
结论 | 第72-73页 |
第3章 FAT10调控survivin表达的机制研究 | 第73-87页 |
材料和方法 | 第73-78页 |
1.材料 | 第73-74页 |
2.细胞培养 | 第74-75页 |
3.免疫共沉淀 | 第75-76页 |
4. Lipofectamine 2000法转染膀胱癌细胞 | 第76页 |
5.蛋白免疫印迹反应(Western blot) | 第76-77页 |
6.蛋白结合竞争实验 | 第77页 |
7.蛋白酶体抑制实验 | 第77页 |
8.体外泛素化实验 | 第77页 |
9.激光共聚焦免疫荧光实验 | 第77-78页 |
10.数据分析及统计方法 | 第78页 |
结果 | 第78-85页 |
1.在膀胱癌细胞中survivin蛋白经过泛素蛋白酶体降解 | 第78-80页 |
2.证实FAT10与survivin存在直接结合 | 第80-81页 |
3. FAT10稳定survivin是通过阻止survivin的泛素化及降解 | 第81-85页 |
讨论 | 第85-86页 |
结论 | 第86-87页 |
全文总结 | 第87-90页 |
致谢 | 第90-91页 |
参考文献 | 第91-94页 |
攻读学位期间的研究成果及荣誉 | 第94-95页 |
综述 | 第95-102页 |
参考文献 | 第99-102页 |