| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 研究课题由来 | 第13页 |
| 2 鱼类的低氧适应机制 | 第13-15页 |
| 2.1 低氧感受信号通路 | 第13-14页 |
| 2.2 团头鲂低氧调控机制 | 第14-15页 |
| 3 miRNA的研究进展 | 第15-20页 |
| 3.1 miRNA的作用机制 | 第15-17页 |
| 3.2 miRNA的功能研究现状 | 第17-18页 |
| 3.3 低氧应答相关miRNA的研究进展 | 第18-20页 |
| 4 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 团头鲂miR-462/731 克隆及启动子活性分析 | 第21-38页 |
| 1 前言 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-30页 |
| 2.1 实验用鱼 | 第22页 |
| 2.2 主要试剂耗材及仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.3 团头鲂基因组DNA的提取 | 第23页 |
| 2.4 团头鲂miR-462/731 及其上游序列的扩增 | 第23-25页 |
| 2.5 miR-462/731 及其上游序列的获得及其生物信息学分析 | 第25-26页 |
| 2.6 包含HRE位点的双荧光素酶报告载体的构建 | 第26-28页 |
| 2.7 细胞转染及其HRE启动子活性分析 | 第28-30页 |
| 2.8 数据分析 | 第30页 |
| 3 实验结果 | 第30-35页 |
| 3.1 团头鲂miR-462/731 扩增及序列分析 | 第30-32页 |
| 3.2 miR-462/731 生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 3.3 团头鲂miR-462/731 启动子活性分析 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 团头鲂miR-462/731 时空表达谱分析 | 第38-53页 |
| 1 前言 | 第38-39页 |
| 2 材料与方法 | 第39-45页 |
| 2.1 主要试剂材料 | 第39页 |
| 2.2 胚胎发育时期样品的采集 | 第39页 |
| 2.3 低氧胁迫组织样品采集 | 第39-40页 |
| 2.4 体外模拟低氧处理细胞miR-462/731 的表达分析 | 第40-41页 |
| 2.5 总小RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.6 miRNA反转录引物设计及其反转录 | 第42-43页 |
| 2.7 定量引物设计 | 第43-44页 |
| 2.8 标曲的建立及miRNA荧光定量检测 | 第44页 |
| 2.9 数据分析 | 第44-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-50页 |
| 3.1 miR-462/731 在胚胎发育过程中的表达谱 | 第45-46页 |
| 3.2 低氧处理对团头鲂miR-462/731 组织表达谱的影响 | 第46-49页 |
| 3.3 低氧处理MAF细胞miR-462/731 的表达分析 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 团头鲂miR-462/731 对细胞增殖和细胞周期的影响 | 第53-60页 |
| 1 前言 | 第53-54页 |
| 2 材料与方法 | 第54-56页 |
| 2.1 细胞系及仪器耗材 | 第54页 |
| 2.2 MAF细胞培养 | 第54页 |
| 2.3 细胞增殖检测 | 第54-55页 |
| 2.4 细胞周期检测 | 第55-56页 |
| 2.5 数据分析 | 第56页 |
| 3 实验结果 | 第56-58页 |
| 3.1 细胞增殖 | 第56-58页 |
| 3.2 细胞周期 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 小结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74页 |
