| 中文摘要 | 第14-16页 |
| ABSTRACT | 第16-18页 |
| 符号说明 | 第19-20页 |
| 第一章 前言 | 第20-28页 |
| 1 海洋动物来源的抗肿瘤多肽 | 第20-22页 |
| 2 颗粒体蛋白的研究进展 | 第22-24页 |
| 2.1 颗粒体蛋白简介 | 第22页 |
| 2.2 颗粒体蛋白研究进展 | 第22-24页 |
| 3 抗肿瘤多肽的作用机制 | 第24-27页 |
| 3.1 影响细胞信号转导 | 第24-25页 |
| 3.2 抑制肿瘤新生血管生成 | 第25页 |
| 3.3 作用于细胞骨架 | 第25-26页 |
| 3.4 抑制细胞端粒酶 | 第26页 |
| 3.5 抑制肿瘤细胞DNA合成 | 第26页 |
| 3.6 增强体内免疫应答 | 第26-27页 |
| 4 本课题的设计思路及拟解决的问题 | 第27-28页 |
| 第二章 hGRN A的基因克隆及载体构建 | 第28-36页 |
| 1 材料 | 第28-29页 |
| 1.1 试剂 | 第28页 |
| 1.2 仪器 | 第28页 |
| 1.3 质粒与菌株 | 第28-29页 |
| 1.4 引物 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-33页 |
| 2.1 溶液配制 | 第29-30页 |
| 2.2 hGRN A的基因克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.1 PCR | 第30页 |
| 2.2.2 PCR产物胶回收 | 第30-31页 |
| 2.3 目的基因与载体的双酶切 | 第31-32页 |
| 2.4 目的基因与载体的连接 | 第32页 |
| 2.5 重组载体转化大肠杆菌 | 第32-33页 |
| 3 实验结果 | 第33-34页 |
| 3.1 hGRN A的基因克隆 | 第33页 |
| 3.2 目的基因与表达载体的双酶切 | 第33-34页 |
| 3.3 测序结果 | 第34页 |
| 4 结果讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 hGRN A的毕赤酵母表达与纯化 | 第36-58页 |
| 1 材料 | 第36-37页 |
| 1.1 试剂 | 第36页 |
| 1.2 仪器 | 第36-37页 |
| 1.3 菌株 | 第37页 |
| 2 实验方法 | 第37-48页 |
| 2.1 溶液配制 | 第37-38页 |
| 2.2 培养基配制 | 第38-39页 |
| 2.3 hGRN A电转入毕赤酵母 | 第39-40页 |
| 2.3.1 准备质粒 | 第39页 |
| 2.3.2 制作酵母感受态 | 第39-40页 |
| 2.3.3 涂平板 | 第40页 |
| 2.4 PCR验证 | 第40-41页 |
| 2.4.1 酵母基因组的提取 | 第40-41页 |
| 2.4.2 PCR | 第41页 |
| 2.5 hGRN A在毕赤酵母中的诱导表达和检测 | 第41-43页 |
| 2.6 hGRN A发酵条件的优化 | 第43-46页 |
| 2.6.1 正交实验设计 | 第43-45页 |
| 2.6.2 单因素实验设计 | 第45-46页 |
| 2.6.3 磷酸盐缓冲液对发酵的影响 | 第46页 |
| 2.7 重组hGRN A的表达 | 第46页 |
| 2.8 重组hGRN A的纯化 | 第46-47页 |
| 2.9 重组hGRN A的透析 | 第47页 |
| 2.10 重组hGRN A的浓度测定 | 第47-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-56页 |
| 3.1 hGRN A电转入毕赤酵母 | 第48-49页 |
| 3.2 PCR验证 | 第49-50页 |
| 3.3 hGRN A在毕赤酵母中的表达情况和检测 | 第50-51页 |
| 3.4 发酵条件的优化 | 第51-55页 |
| 3.4.1 正交实验 | 第51-53页 |
| 3.4.2 单因素实验 | 第53-54页 |
| 3.4.3 磷酸盐缓冲液对发酵的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.4 优化发酵条件前后蛋白产量的对比 | 第55页 |
| 3.5 重组hGRN A的纯化 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 重组GRN A的抗肿瘤活性研究 | 第58-67页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 1.1 试剂 | 第58页 |
| 1.2 仪器 | 第58页 |
| 1.3 细胞株 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-62页 |
| 2.1 溶液配置 | 第59页 |
| 2.2 重组hGRN A的制备 | 第59页 |
| 2.3 细胞的复苏与培养 | 第59-60页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第59页 |
| 2.3.2 细胞的传代培养 | 第59-60页 |
| 2.4 MTT法检测重组hGRN A对人肿瘤细胞增殖的影响 | 第60页 |
| 2.5 显微镜观察重组hGRN A对肿瘤细胞形态的影响 | 第60-61页 |
| 2.6 DAPI染色观察 | 第61页 |
| 2.7 Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第61-62页 |
| 3 实验结果 | 第62-66页 |
| 3.1 MTT法检测重组hGRN A对人肿瘤细胞增殖的影响 | 第62页 |
| 3.2 显微镜观察重组hGRN A对肿瘤细胞形态的影响 | 第62-64页 |
| 3.3 DAPI染色观察 | 第64页 |
| 3.4 Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-67页 |
| 全文结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第77页 |
