| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第9-12页 |
| 第2章 材料与方法 | 第12-32页 |
| 2.1 主要实验设备 | 第12-13页 |
| 2.2 主要实验材料 | 第13页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第13页 |
| 2.2.2 细胞株 | 第13页 |
| 2.3 主要试剂 | 第13-15页 |
| 2.4 主要溶液及试剂配置 | 第15-17页 |
| 2.4.1 PBS缓冲液 | 第15页 |
| 2.4.2 Tris.HCl缓冲液 | 第15页 |
| 2.4.3 4 %SDS溶液 | 第15页 |
| 2.4.4 牛奶封闭液 | 第15-16页 |
| 2.4.5 电泳缓冲液 | 第16页 |
| 2.4.6 转移缓冲液 | 第16页 |
| 2.4.7 10 %分离胶(5ml) | 第16页 |
| 2.4.8 5 %浓缩胶(2ml) | 第16-17页 |
| 2.4.9 1.5 %琼脂糖凝胶 | 第17页 |
| 2.5 实验方法与步骤 | 第17-31页 |
| 2.5.1 小鼠骨髓来源的肥大细胞培养及形态观察 | 第17页 |
| 2.5.2 甲苯胺蓝染色法及流式细胞术鉴定肥大细胞 | 第17-18页 |
| 2.5.3 小鼠CCR3基因慢病毒shRNA载体质粒的构建及鉴定 | 第18-27页 |
| 2.5.4 shRNA-mCCR3慢病毒转染预实验 | 第27页 |
| 2.5.5 shRNA-mCCR3慢病毒正式转染试验 | 第27-28页 |
| 2.5.6 肥大细胞的WesternBolt检测 | 第28-29页 |
| 2.5.7 肥大细胞的qRT-PCR检测 | 第29页 |
| 2.5.8 CCK8实验检测肥大细胞增殖 | 第29页 |
| 2.5.9 流式细胞术检测肥大细胞凋亡 | 第29-30页 |
| 2.5.10 Transwell实验检测肥大细胞趋化性 | 第30页 |
| 2.5.11 Elisa实验检测肥大细胞脱颗粒 | 第30-31页 |
| 2.6 数据处理及统计学分析 | 第31-32页 |
| 第3章 实验结果 | 第32-47页 |
| 3.1 小鼠骨髓源性肥大细胞诱导成功 | 第32-34页 |
| 3.1.1 原代培养肥大细胞观察 | 第32-33页 |
| 3.1.2 肥大细胞甲苯胺蓝染色 | 第33页 |
| 3.1.3 肥大细胞流式细胞鉴定 | 第33-34页 |
| 3.2 成功构建CCR3慢病毒干扰载 | 第34-40页 |
| 3.2.1 慢病毒载体质粒的PCR测序鉴定 | 第34-35页 |
| 3.2.2 慢病毒原液滴度测定 | 第35-36页 |
| 3.2.3 qRT-PCR检测CCR3-shRNA1-3对CCR3mRNA的沉默效率 | 第36-37页 |
| 3.2.4 不同滴度及时间干扰质粒的qRT-PCR及Western-Blot检测 | 第37-40页 |
| 3.3 干扰CCR3基因抑制肥大细胞CCR3mRNA及蛋白的表达 | 第40-42页 |
| 3.3.1 肥大细胞的qRT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.3.2 肥大细胞的Western-Blot检测 | 第41-42页 |
| 3.4 干扰CCR3基因抑制肥大细胞的增殖 | 第42-43页 |
| 3.5 干扰CCR3基因促进肥大细胞的凋亡 | 第43-44页 |
| 3.6 干扰CCR3基因抑制肥大细胞的趋化性 | 第44-46页 |
| 3.7 干扰CCR3基因抑制肥大细胞的激活脱颗粒 | 第46-47页 |
| 第4章 讨论 | 第47-50页 |
| 第5章 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第55-56页 |
| 综述 | 第56-63页 |
| References | 第61-63页 |
