| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-27页 |
| 1.1 CBF基因相关研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.1 CBF转录因子的结构特点 | 第13页 |
| 1.1.2 转录因子CBF的基因表达调控 | 第13-15页 |
| 1.1.3 CBF基因调控的下游基因 | 第15页 |
| 1.1.4 CBF提高抗逆能力相关基因工程的研究 | 第15-16页 |
| 1.2 木霉的相关研究 | 第16-23页 |
| 1.2.1 木霉的生物防治的相关研究 | 第16-19页 |
| 1.2.2 木霉在生物防治中的应用前景 | 第19-20页 |
| 1.2.3 丝状真菌的转化方法 | 第20-23页 |
| 1.3 改良木霉的研究进展 | 第23-27页 |
| 1.3.1 提高木霉生防作用的相关研究 | 第23-25页 |
| 1.3.2 木霉的适应性研究 | 第25-27页 |
| 第二章 ATMT介导的CBF1对绿色木霉的转化 | 第27-48页 |
| 2.1 前言 | 第27页 |
| 2.2 材料 | 第27-31页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要试剂及仪器 | 第28-30页 |
| 2.2.3 培养基与培养条件 | 第30页 |
| 2.2.4 实验所用到的引物 | 第30-31页 |
| 2.3 方法 | 第31-41页 |
| 2.3.1 菌种保藏 | 第31页 |
| 2.3.2 大肠杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.3 农杆菌感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.3.4 入门载体pENTR~(TM)/D-TOPO~(?)-CBF1的构建 | 第33-36页 |
| 2.3.5 构建ImpGWB502-CBF1与ImpGWB505-CBF1-GFP载体 | 第36-38页 |
| 2.3.6 农杆菌EHA105介导的对绿色木霉的转化 | 第38-39页 |
| 2.3.7 转化子生物学性状分析 | 第39-40页 |
| 2.3.8 木霉基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.4 结果与分析 | 第41-46页 |
| 2.4.1 CBF基因克隆结果 | 第41页 |
| 2.4.2 入门载体pENTR~(TM)/D-TOPO~(?)-CBF1构建结果 | 第41-42页 |
| 2.4.3 构建ImpGWB502-CBF1与ImpGWB505-CBF1-GFP载体 | 第42-43页 |
| 2.4.4 转化子分析及分离鉴定 | 第43-46页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 绿色木霉转化子中CBF1基因表达分析 | 第48-57页 |
| 3.1 前言 | 第48页 |
| 3.2 材料 | 第48-49页 |
| 3.2.1 菌株 | 第48页 |
| 3.2.2 供试试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 3.2.3 培养基 | 第49页 |
| 3.2.4 培养基与培养条件 | 第49页 |
| 3.2.5 实验所用引物 | 第49页 |
| 3.3 方法 | 第49-53页 |
| 3.3.1 RNA提取 | 第49-50页 |
| 3.3.2 RNA纯化 | 第50-51页 |
| 3.3.3 RT-PCR | 第51-52页 |
| 3.3.4 CBF1-GFP荧光表达情况 | 第52页 |
| 3.3.5 CBF1-GFP转化子激光共聚焦显微镜观察 | 第52-53页 |
| 3.4 结果与分析 | 第53-55页 |
| 3.4.1 转化子CBF1基因表达分析 | 第53页 |
| 3.4.2 转化子CBF1-GFP荧光显微镜表达结果 | 第53-54页 |
| 3.4.3 激光共聚焦显微镜下转化子CBF1-GFP显微图像 | 第54-55页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 转CBF1基因木霉表现型分析 | 第57-72页 |
| 4.1 前言 | 第57-58页 |
| 4.2 材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 菌株 | 第58页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第58页 |
| 4.2.3 培养基与培养条件 | 第58-59页 |
| 4.2.4 缓冲液的配制 | 第59页 |
| 4.3 方法 | 第59-61页 |
| 4.3.1 CBF1与CBF1-GFP转化子在PDA平板上的生长情况 | 第59页 |
| 4.3.2 CBF1与CBF1-GFP转化子在NaC1平板上的表现型 | 第59-60页 |
| 4.3.3 CBF1与CBF1-GFP转化子在加有1 mol/L的甘露醇与山梨醇平板的表现型 | 第60页 |
| 4.3.4 转化子耐低温研究 | 第60页 |
| 4.3.5 转化子耐高温研究 | 第60页 |
| 4.3.6 滤纸酶活(FPA)的测定 | 第60-61页 |
| 4.4 结果与分析 | 第61-69页 |
| 4.4.1 转化子在PDA平板上的生长情况 | 第61-63页 |
| 4.4.2 转化子在NaCl平板上的生长情况 | 第63-64页 |
| 4.4.3 转化子在含1mol/L的甘露醇的PDA平板生长情况 | 第64-65页 |
| 4.4.4 转化子耐低温研究 | 第65-67页 |
| 4.4.5 转化子耐高温研究 | 第67-68页 |
| 4.4.6 纤维素酶酶活(FPA)测定 | 第68-69页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第69-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-75页 |
| 5.1 结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第81页 |
