| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词和术语表 | 第16-18页 |
| 1 绪论 | 第18-28页 |
| 1.1 研究背景 | 第18-27页 |
| 1.1.1 卤虫概况 | 第18-19页 |
| 1.1.2 胞自噬概况 | 第19-24页 |
| 1.1.3 自噬调控信号通路的研究概况 | 第24-26页 |
| 1.1.4 p8的研究概况 | 第26-27页 |
| 1.2 展望 | 第27页 |
| 1.3 研究目的、方法、意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-52页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-52页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 2.2.3 分子克隆 | 第31-36页 |
| 2.2.4 蛋白的原核表达与纯化 | 第36-37页 |
| 2.2.4.1 检测表达产物是以可溶性物质还是以包涵体形式存在 | 第36页 |
| 2.2.4.2 使用Ni珠纯化含有His标签的融合蛋白 | 第36-37页 |
| 2.2.5 抗体制备 | 第37页 |
| 2.2.6 Western blotting | 第37-39页 |
| 2.2.6.1 总蛋白提取 | 第37-38页 |
| 2.2.6.2 蛋白样品检测及转膜 | 第38页 |
| 2.2.6.3 抗体检测 | 第38-39页 |
| 2.2.7 胶体金偶联免疫组化 | 第39-40页 |
| 2.2.8 氨基酸序列比对,进化分析 | 第40页 |
| 2.2.9 卤虫dsRNA干涉 | 第40-42页 |
| 2.2.9.1 dsRNA表达质粒构建 | 第40页 |
| 2.2.9.2 小量质粒抽提 | 第40-41页 |
| 2.2.9.3 dsRNA的诱导表达及抽提 | 第41-42页 |
| 2.2.9.4 卤虫的显微注射 | 第42页 |
| 2.2.10 核质分离 | 第42-43页 |
| 2.2.11 荧光定量PCR | 第43页 |
| 2.2.12 真核表达质粒的构建及抽提 | 第43-44页 |
| 2.2.13 细胞培养、转染及药物处理 | 第44-46页 |
| 2.2.14 流式细胞分选 | 第46-47页 |
| 2.2.15 siRNA干涉 | 第47-50页 |
| 2.2.15.1 siRNA合成 | 第47-49页 |
| 2.2.15.2 siRNA转染 | 第49-50页 |
| 2.2.15.3 半定量PCR | 第50页 |
| 2.2.16 细胞免疫荧光 | 第50-52页 |
| 3 结果 | 第52-71页 |
| 3.1 卤虫两种不同发育模式中自噬水平的分析 | 第52-56页 |
| 3.1.1 Ar-ATG5和Ar-ATG8序列获得 | 第52-54页 |
| 3.1.2 卤虫两种生殖方式中自噬的特征分析 | 第54-56页 |
| 3.2 AMPK/TOR和Ar-p8分别调控卤虫两种生殖方式的自噬 | 第56-61页 |
| 3.2.1 卤虫两种生殖方式中AMPK/TOR的蛋白水平分析 | 第56-57页 |
| 3.2.2 卤虫休眠胚胎形成过程中Ar-p8调控自噬的分子机制 | 第57-59页 |
| 3.2.3 卤虫Ar-p8调控内质网自噬的分析 | 第59-60页 |
| 3.2.4 卤虫受到环境胁迫时引发AMPK/TOR调控的自噬 | 第60-61页 |
| 3.3 p8诱导人胃癌MKN45细胞自噬水平上升 | 第61-64页 |
| 3.3.1 Ar-p8在人胃癌MKN45细胞中引发AMPK/mTOR不依赖的自噬 | 第61-62页 |
| 3.3.2 Hu-p8在人胃癌MKN45细胞中引发AMPK/mTOR不依赖的自噬 | 第62-64页 |
| 3.4 Hu-p8调控由脂肪毒性引发的内质网自噬 | 第64-71页 |
| 3.4.1 AMPK/mTOR和Hu-p8分别调控由营养缺乏和脂肪毒性引发的自噬 | 第64-67页 |
| 3.4.2 营养缺乏引起线粒体自噬,脂肪毒性引起内质网自噬 | 第67页 |
| 3.4.3 Hu-p8调控内质网自噬的分子机制 | 第67-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 极低水平的自噬对卤虫休眠胚胎维持静息状态的重要作用 | 第71页 |
| 4.2 Ar-p8调控的自噬可能是与休眠胚胎形成相关的主动调控的自噬 | 第71-73页 |
| 4.3 p8对自噬的调控作用 | 第73页 |
| 4.4 营养缺乏和脂肪毒性引发不同类型的自噬 | 第73-75页 |
| 5 结论 | 第75页 |
| 6 展望 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 附录一 论文中使用的引物 | 第83-87页 |
| 附录二 常用试剂配制 | 第87-93页 |
| 作者简介 | 第93-94页 |
