| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一部分 AD-MSCs和HD-MSCs的原代培养和鉴定 | 第15-26页 |
| 一、实验设计 | 第15页 |
| 二、实验材料 | 第15-16页 |
| (一) 细胞来源及种属 | 第15页 |
| (二) 主要材料、仪器和设备 | 第15页 |
| (三) 主要试剂 | 第15-16页 |
| 三、实验方法 | 第16-20页 |
| (一) 临床MSCs样本的获取 | 第16-17页 |
| 1. AD-MSCs的获取 | 第16页 |
| 2. HD-MSCs的获取 | 第16-17页 |
| (二) MSCs的原代培养 | 第17-18页 |
| (三) MSCs的鉴定 | 第18-19页 |
| 1. 一般特性 | 第18-19页 |
| 2. 表型鉴定 | 第19页 |
| 3. 分化能力鉴定 | 第19页 |
| (四) total RNA的提取 | 第19-20页 |
| 四、实验结果 | 第20-24页 |
| (一) MSCs原代培养和鉴定 | 第20-24页 |
| 1、形态学 | 第20页 |
| 2、生长曲线 | 第20-21页 |
| 3、细胞周期 | 第21-22页 |
| 4、表型 | 第22页 |
| 5、分化能力 | 第22-24页 |
| (二) total RNA提取 | 第24页 |
| 五、分析与讨论 | 第24-25页 |
| 六、结论和意义 | 第25-26页 |
| 第二部分 RNA-seq及生物信息学分析 | 第26-48页 |
| 一、实验设计 | 第26页 |
| 二、实验材料 | 第26页 |
| 三、实验方法 | 第26-28页 |
| (二) 转录组测序(RNA-seq) | 第26-28页 |
| 1、实验流程 | 第26-27页 |
| 2. 样品检测 | 第27页 |
| 3. 文库构建 | 第27页 |
| 4. 文库质控 | 第27-28页 |
| 5. 上机测序 | 第28页 |
| 四、实验结果 | 第28-44页 |
| (一) 生物信息学分析流程 | 第28页 |
| (二) 测序数据及其质量控制 | 第28-31页 |
| 1、测序碱基质量值 | 第28-29页 |
| 2、测序碱基含量分布 | 第29-30页 |
| 3、测序质量控制 | 第30页 |
| 4、测序数据产出统计 | 第30-31页 |
| (三) 基因表达谱数据与参考基因组序列比对 | 第31-33页 |
| 1、比对效率统计 | 第31-32页 |
| 2、比对结果作图 | 第32-33页 |
| (四) 基因表达谱文库质量评估 | 第33-35页 |
| 1、mRNA片段化随机性检验 | 第33-34页 |
| 2、基因表达谱测序数据饱和度检验 | 第34-35页 |
| (五) 基因表达量分析 | 第35-37页 |
| 1、基因表达定量 | 第35页 |
| 2、样品基因表达量总体分布 | 第35-37页 |
| (六) 差异表达分析 | 第37-41页 |
| 1、重复相关性评估 | 第37-38页 |
| 2、差异表达筛选 | 第38-40页 |
| 3、差异表达基因数目统计 | 第40-41页 |
| 4、差异表达基因聚类分析 | 第41页 |
| (七) 差异表达基因功能注释和富集分析 | 第41-44页 |
| 1、差异表达基因GO分类 | 第41-42页 |
| 2、差异表达基因KEGG注释 | 第42-43页 |
| 3、差异表达基因蛋白互作网络 | 第43-44页 |
| 五、分析与讨论 | 第44-47页 |
| 六、结论和意义 | 第47-48页 |
| 第三部分 qRT-PCR验证差异表达基因和NCAM1基因的细胞功能验证实验 | 第48-62页 |
| 一、实验设计 | 第48-49页 |
| 二、实验材料 | 第49-50页 |
| (一) 实验仪器 | 第49页 |
| (二) 实验试剂与耗材 | 第49-50页 |
| 三、实验方法 | 第50-56页 |
| (一) qRT-PCR验证测序结果 | 第50-52页 |
| 1、total RNA的提取 | 第50-51页 |
| 2、逆转录反应 | 第51页 |
| 3、荧光定量PCR | 第51-52页 |
| (二) 腺病毒感染实验 | 第52页 |
| (三) 细胞功能实验:增殖、迁移和共培养 | 第52-53页 |
| 1、增殖实验 | 第52-53页 |
| 2、迁移实验 | 第53页 |
| 3、共培养实验 | 第53页 |
| (四) 细胞周期和凋亡 | 第53页 |
| (五) 蛋白印迹( Western Blot,WB) | 第53-56页 |
| 1、提取细胞的总蛋白 | 第53-54页 |
| 2、蛋白浓度测定(BCA法) | 第54页 |
| 3、蛋白免疫印迹实验 | 第54-56页 |
| 四、实验结果 | 第56-60页 |
| (一) qRT-PCR验证RNA-seq结果 | 第56-57页 |
| (二) 病毒感染效率 | 第57页 |
| (三)MSCs细胞功能 | 第57-59页 |
| 1、细胞迁移 | 第57-58页 |
| 2、细胞增殖 | 第58页 |
| 3、细胞周期 | 第58-59页 |
| (四) SMCs中elastin的表达 | 第59-60页 |
| 五、分析与讨论 | 第60-61页 |
| 六、结论和意义 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |
| 综述 间充质干细胞治疗心血管系统疾病的机制研究进展 | 第68-77页 |
| 一、MSC的一般特性 | 第68-69页 |
| 二、应用 | 第69-70页 |
| (一) 近期临床研究 | 第69-70页 |
| (二) 移植途径 | 第70页 |
| (三) 移植时机 | 第70页 |
| 三、MSC功能相关机制研究 | 第70-76页 |
| (一) 归巢机制 | 第71页 |
| (二) 分化机制 | 第71-72页 |
| (三) 旁分泌机制 | 第72-76页 |
| 1. 免疫抑制 | 第72-73页 |
| 2. 促血管生成 | 第73-74页 |
| 3. 抑制重构 | 第74-75页 |
| 4. 外泌体 | 第75页 |
| 5. microRNA | 第75-76页 |
| 四、问题和展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-86页 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况说明 | 第86-87页 |
| 论文发表情况 | 第86页 |
| 参编专著情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
