| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 PED的流行与危害 | 第12-13页 |
| 1.2 PEDV的病原学特征 | 第13-14页 |
| 1.2.1 病原分类和主要生物学特征 | 第13页 |
| 1.2.2 基因组结构及其编码蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3 PEDV的致病性与PED主要病理学特征 | 第14-15页 |
| 1.4 基于S基因的PEDV新型疫苗的研究进展 | 第15页 |
| 1.5 M细胞靶向性疫苗研究进展 | 第15-16页 |
| 1.6 树突状细胞靶向性疫苗研究进展 | 第16-17页 |
| 1.7 乳酸杆菌表达外源抗原研究进展 | 第17页 |
| 1.8 研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 病毒、菌种和质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.3 引物合成 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.5 主要实验仪器与设备 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-35页 |
| 2.2.1 表达ps420、ps420-co1、ps420-DCpep、ps420-co1-DCpep融合基因重组乳酸杆菌的构建 | 第20-29页 |
| 2.2.2 重组干酪乳杆菌的表达及鉴定 | 第29页 |
| 2.2.3 重组大肠杆菌的构建、表达及蛋白纯化 | 第29-31页 |
| 2.2.4 重组乳酸菌一次免疫效果评价 | 第31-33页 |
| 2.2.5 重组乳酸菌二次免疫效果评价 | 第33-35页 |
| 3 结果 | 第35-54页 |
| 3.1 S1基因的PCR扩增结果 | 第35页 |
| 3.2 ps420’基因的PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| 3.3 目的基因的PCR扩增结果 | 第36页 |
| 3.4 重组乳酸杆菌的鉴定 | 第36-39页 |
| 3.4.1 重组干酪乳杆菌表达载体pPG-T7g10-PPT-ps420的鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.4.2 重组干酪乳杆菌表达载体pPG-T7g10-PPT-ps420-co1的鉴定结果 | 第37-38页 |
| 3.4.3 重组干酪乳杆菌表达载体pPG-T7g10-PPT-ps420-DCpep的鉴定结果 | 第38页 |
| 3.4.4 重组干酪乳杆菌表达载体pPG-T7g10-PPT-ps420-co1-DCpep的鉴定结果 | 第38-39页 |
| 3.5 重组干酪乳杆菌表达蛋白的鉴定结果 | 第39-42页 |
| 3.5.1 Western blot鉴定结果 | 第39-41页 |
| 3.5.2 目的蛋白定位的激光共聚焦检测 | 第41-42页 |
| 3.6 重组大肠杆菌的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.6.1 目的基因ps420的PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| 3.6.2 重组大肠杆菌表达载体p ET-32a-ps420的鉴定结果 | 第43页 |
| 3.7 重组大肠杆菌表达蛋白的鉴定与纯化 | 第43-45页 |
| 3.7.1 SDS-PAGE鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.7.2 Western blot鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.8 重组干酪乳杆菌一次免疫小鼠免疫指标的测定 | 第45-49页 |
| 3.8.1 小鼠一次免疫血清Ig G测定结果 | 第45页 |
| 3.8.2 小鼠一次免疫粪便s IgA测定结果 | 第45-46页 |
| 3.8.3 小鼠一次免疫外生殖道s Ig A测定结果 | 第46-47页 |
| 3.8.4 肠黏液中特异性s IgA检测结果 | 第47页 |
| 3.8.5 脾淋巴细胞增殖结果 | 第47-48页 |
| 3.8.6 细胞因子测定结果 | 第48页 |
| 3.8.7 抗体中和效价检测结果 | 第48-49页 |
| 3.9 重组干酪乳杆菌二次免疫小鼠免疫学指标的测定 | 第49-54页 |
| 3.9.1 免疫鼠血清抗体IgG水平检测结果 | 第49-50页 |
| 3.9.2 免疫鼠粪便中s IgA检测结果 | 第50页 |
| 3.9.3 免疫鼠外生殖道中s IgA检测结果 | 第50-51页 |
| 3.9.4 免疫鼠肠黏液中s IgA检测结果 | 第51-52页 |
| 3.9.5 脾淋巴细胞增殖结果 | 第52页 |
| 3.9.6 细胞因子测定结果 | 第52-53页 |
| 3.9.7 抗体中和效价检测结果 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 有关PED感染和免疫的特点 | 第54-55页 |
| 4.2 目的基因的选择 | 第55页 |
| 4.3 靶向修饰重组干酪乳杆菌免疫效果评价 | 第55-56页 |
| 4.4 不同免疫程序诱导的免疫应答水平 | 第56-57页 |
| 4.5 靶向修饰重组乳酸菌诱导的免疫应答类型 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
