| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 WRKY转录因子的结构特征与分类 | 第12-14页 |
| 1.2 WRKY转录因子的功能 | 第14-17页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子参与调节植物生长发育 | 第14页 |
| 1.2.2 WRKY转录因子参与植物对生物逆境的响应 | 第14-15页 |
| 1.2.3 WRKY转录因子参与植物对非生物逆境的响应 | 第15-17页 |
| 1.3 WRKY转录因子调控应激反应的分子机制 | 第17-19页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子的自调控和交叉调控作用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子在蛋白水平的调控作用 | 第18-19页 |
| 1.3.3 WRKY转录因子参与植物激素信号转导 | 第19页 |
| 1.4 WRKY转录因子在棉花中的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 引物 | 第23-25页 |
| 2.1.5 培养基配置 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-42页 |
| 2.2.1 植物材料的培养条件及处理方法 | 第25-26页 |
| 2.2.2 植物RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.2.3 RNA样品中基因组DNA的去除 | 第27页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR检测 | 第27-28页 |
| 2.2.5 目的基因序列的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.6 PCR产物的回收 | 第29页 |
| 2.2.7 目的片段与载体的连接 | 第29-30页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第30-31页 |
| 2.2.9 大肠杆菌质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| 2.2.10 重组质粒酶切验证 | 第32页 |
| 2.2.11 农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| 2.2.12 农杆菌介导的植物瞬时侵染 | 第33页 |
| 2.2.13 VIGS技术沉默棉花植株 | 第33页 |
| 2.2.14 农杆菌介导的叶盘转化法 | 第33-34页 |
| 2.2.15 转基因烟草萌发率和根长实验 | 第34页 |
| 2.2.16 二氨基苯丙胺组织化学染色法 | 第34-35页 |
| 2.2.17 氮蓝四?组织化学染色法 | 第35页 |
| 2.2.18 测定叶片失水率 | 第35页 |
| 2.2.19 测定叶片保卫细胞气孔开度 | 第35页 |
| 2.2.20 酵母感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.21 酵母单杂交实验 | 第36-37页 |
| 2.2.22 重组蛋白的原核表达及纯化 | 第37-39页 |
| 2.2.23 Westernblot检测目的基因 | 第39页 |
| 2.2.24 EMSA试验 | 第39-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-67页 |
| 3.1 棉花GhWRKY21 基因的分离及生物信息学分析 | 第42-44页 |
| 3.1.1 GhWRKY21 基因的分离及序列分析 | 第42-43页 |
| 3.1.2 GhWRKY21 生物信息学分析 | 第43-44页 |
| 3.2 棉花GhWRKY21 基因的亚细胞定位 | 第44-45页 |
| 3.3 棉花GhWRKY21 基因的表达模式分析 | 第45-47页 |
| 3.4 棉花中GhWRKY21 基因的功能分析 | 第47-50页 |
| 3.4.1 GhWRKY21 基因沉默棉花的获得与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.4.2 GhWRKY21 基因沉默棉花的抗旱性分析 | 第48-49页 |
| 3.4.3 GhWRKY21 基因沉默棉花的耐热性分析 | 第49-50页 |
| 3.5 超表达GhWRKY21 转基因烟草的抗旱性分析 | 第50-55页 |
| 3.5.1 GhWRKY21 超表达转基因烟草的获得与鉴定 | 第50-51页 |
| 3.5.2 GhWRKY21 超表达植株对干旱胁迫的敏感性增加 | 第51-55页 |
| 3.6 GhWRKY21 通过影响ABA信号通路调节植物的抗旱性 | 第55-63页 |
| 3.6.1 GhWRKY21 介导的棉花抗旱性与ABA有关 | 第55-57页 |
| 3.6.2 棉花中A族PP2Cs的鉴定及启动子分析 | 第57-59页 |
| 3.6.3 GhWRKY21 通过结合GhHAB的启动子来调控其表达 | 第59-62页 |
| 3.6.4 GhHAB负调控棉花对干旱胁迫的耐受性 | 第62-63页 |
| 3.7 超表达GhWRKY21 转基因烟草的耐热性分析 | 第63-67页 |
| 3.7.1 GhWRKY21 超表达植株对热胁迫的敏感性增加 | 第63-65页 |
| 3.7.2 GhWRKY21 超表达植株中热应激响应相关基因的表达水平 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-71页 |
| 4.1 GhWRKY21 是典型的Ⅱd族 WRKY转录因子 | 第67页 |
| 4.2 棉花中GhWRKY21 通过调节GhHAB的表达来调控ABA介导的耐旱性 | 第67-69页 |
| 4.3 GhWRKY21 负调控植物的热应激反应 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第85页 |
