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免疫共沉淀与质谱联用检测TRIM3相互作用蛋白

摘要第2-3页
Abstract第3页
引言第8-10页
1 文献综述第10-27页
    1.1 蛋白相互作用研究方法概述第10-11页
    1.2 TRIM3及其亚家族(TRIM-NHL)蛋白第11-19页
        1.2.1 TRIM3的结构第11-13页
        1.2.2 TRIM3的研究进展第13页
        1.2.3 与TRIM3同源的蛋白(Brat,Mei-P26,NCL-1 和NHL-2)第13-15页
        1.2.4 TRIM2第15页
        1.2.5 TRIM32及其同源蛋白(Abba和NHL-1)第15-16页
        1.2.6 TRIM71及其同源蛋白(LIN-41、Wech)第16-19页
    1.3 TRIM蛋白与p53第19-25页
        1.3.1 p53与TRIM19第20-21页
        1.3.2 其它可以调节p53的TRIM蛋白第21-23页
        1.3.3 TRIM蛋白与MDM2第23-24页
        1.3.4 TRIM蛋白通过其它蛋白调节p53第24页
        1.3.5 p53调节TRIM蛋白第24-25页
    1.4 论文的选题依据和研究内容第25-27页
        1.4.1 选题依据第25-26页
        1.4.2 研究内容第26-27页
2 LC-MS/MS联用检测TRIM3相互作用蛋白第27-41页
    2.1 引言第27页
    2.2 仪器与试剂第27-29页
        2.2.1 仪器第27-28页
        2.2.2 试剂第28-29页
        2.2.3 菌种、细胞和质粒第29页
    2.3 实验方法第29-35页
        2.3.1 质粒转化第29页
        2.3.2 质粒提取第29页
        2.3.3 细胞培养第29-30页
        2.3.4 细胞转染第30页
        2.3.5 细胞裂解第30页
        2.3.6 免疫共沉淀检测相互作用蛋白第30页
        2.3.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白第30-31页
        2.3.8 免疫印迹检测蛋白表达第31-32页
        2.3.9 银染检测蛋白表达第32页
        2.3.10 胶内酶解实验消化蛋白第32-34页
        2.3.11 LC-MS/MS分析样品成分第34-35页
    2.4 结果与分析第35-40页
        2.4.1 TRIM3相互作用蛋白第35-36页
        2.4.2 TRIM3相互作用蛋白的细胞定位第36-37页
        2.4.3 TRIM3相互作用蛋白参与的生物过程第37-38页
        2.4.4 TRIM3相互作用蛋白参与的信号通路第38-40页
    2.5 小结第40-41页
3 TRIM3与p53间的相互作用第41-48页
    3.1 引言第41页
    3.2 仪器与试剂第41-42页
        3.2.1 仪器第41页
        3.2.2 试剂第41-42页
        3.2.3 菌种、细胞和质粒第42页
    3.3 实验方法第42-43页
        3.3.1 细胞培养第42页
        3.3.2 细胞转染第42页
        3.3.3 细胞裂解第42页
        3.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白第42页
        3.3.5 免疫印迹检测蛋白表达第42-43页
        3.3.6 荧光素酶报告基因检测基因转录活性第43页
    3.4 结果与分析第43-47页
        3.4.1 在HEK-293T细胞中TRIM3能促进p53的表达第43-44页
        3.4.2 TRIM3对p53表达水平的影响第44-46页
        3.4.3 TRIM3通过p53来影响p21的启动子活性第46-47页
    3.5 小结第47-48页
4 TRIM3对宫颈癌细胞和乳腺癌细胞增殖的影响第48-59页
    4.1 引言第48页
    4.2 仪器与试剂第48-49页
        4.2.1 仪器第48页
        4.2.2 试剂第48页
        4.2.3 菌种、细胞和质粒第48-49页
    4.3 实验方法第49-52页
        4.3.1 细胞培养第49页
        4.3.2 细胞转染第49页
        4.3.3 PCR钓取目的蛋白第49-50页
        4.3.4 MTT实验检测细胞增殖第50页
        4.3.5 克隆形成实验检测细胞增殖第50页
        4.3.6 划痕实验检测细胞迁移能力第50页
        4.3.7 总RNA提取第50-51页
        4.3.8 逆转录实验获得cDNA第51页
        4.3.9 流式细胞术检测细胞周期第51-52页
    4.4 结果与分析第52-58页
        4.4.1 不同细胞系中TRIM3的表达情况第52页
        4.4.2 过表达TRIM3对细胞增殖能力的影响第52-55页
        4.4.3 过表达TRIM3对细胞迁移能力的影响第55-56页
        4.4.4 过表达TRIM3对细胞周期的影响第56-58页
    4.5 小结第58-59页
结论第59-60页
参考文献第60-68页
攻读硕士学位期间发表学术论文情况第68-69页
致谢第69-71页

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