摘要 | 第2-3页 |
Abstract | 第3页 |
引言 | 第8-10页 |
1 文献综述 | 第10-27页 |
1.1 蛋白相互作用研究方法概述 | 第10-11页 |
1.2 TRIM3及其亚家族(TRIM-NHL)蛋白 | 第11-19页 |
1.2.1 TRIM3的结构 | 第11-13页 |
1.2.2 TRIM3的研究进展 | 第13页 |
1.2.3 与TRIM3同源的蛋白(Brat,Mei-P26,NCL-1 和NHL-2) | 第13-15页 |
1.2.4 TRIM2 | 第15页 |
1.2.5 TRIM32及其同源蛋白(Abba和NHL-1) | 第15-16页 |
1.2.6 TRIM71及其同源蛋白(LIN-41、Wech) | 第16-19页 |
1.3 TRIM蛋白与p53 | 第19-25页 |
1.3.1 p53与TRIM19 | 第20-21页 |
1.3.2 其它可以调节p53的TRIM蛋白 | 第21-23页 |
1.3.3 TRIM蛋白与MDM2 | 第23-24页 |
1.3.4 TRIM蛋白通过其它蛋白调节p53 | 第24页 |
1.3.5 p53调节TRIM蛋白 | 第24-25页 |
1.4 论文的选题依据和研究内容 | 第25-27页 |
1.4.1 选题依据 | 第25-26页 |
1.4.2 研究内容 | 第26-27页 |
2 LC-MS/MS联用检测TRIM3相互作用蛋白 | 第27-41页 |
2.1 引言 | 第27页 |
2.2 仪器与试剂 | 第27-29页 |
2.2.1 仪器 | 第27-28页 |
2.2.2 试剂 | 第28-29页 |
2.2.3 菌种、细胞和质粒 | 第29页 |
2.3 实验方法 | 第29-35页 |
2.3.1 质粒转化 | 第29页 |
2.3.2 质粒提取 | 第29页 |
2.3.3 细胞培养 | 第29-30页 |
2.3.4 细胞转染 | 第30页 |
2.3.5 细胞裂解 | 第30页 |
2.3.6 免疫共沉淀检测相互作用蛋白 | 第30页 |
2.3.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 | 第30-31页 |
2.3.8 免疫印迹检测蛋白表达 | 第31-32页 |
2.3.9 银染检测蛋白表达 | 第32页 |
2.3.10 胶内酶解实验消化蛋白 | 第32-34页 |
2.3.11 LC-MS/MS分析样品成分 | 第34-35页 |
2.4 结果与分析 | 第35-40页 |
2.4.1 TRIM3相互作用蛋白 | 第35-36页 |
2.4.2 TRIM3相互作用蛋白的细胞定位 | 第36-37页 |
2.4.3 TRIM3相互作用蛋白参与的生物过程 | 第37-38页 |
2.4.4 TRIM3相互作用蛋白参与的信号通路 | 第38-40页 |
2.5 小结 | 第40-41页 |
3 TRIM3与p53间的相互作用 | 第41-48页 |
3.1 引言 | 第41页 |
3.2 仪器与试剂 | 第41-42页 |
3.2.1 仪器 | 第41页 |
3.2.2 试剂 | 第41-42页 |
3.2.3 菌种、细胞和质粒 | 第42页 |
3.3 实验方法 | 第42-43页 |
3.3.1 细胞培养 | 第42页 |
3.3.2 细胞转染 | 第42页 |
3.3.3 细胞裂解 | 第42页 |
3.3.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白 | 第42页 |
3.3.5 免疫印迹检测蛋白表达 | 第42-43页 |
3.3.6 荧光素酶报告基因检测基因转录活性 | 第43页 |
3.4 结果与分析 | 第43-47页 |
3.4.1 在HEK-293T细胞中TRIM3能促进p53的表达 | 第43-44页 |
3.4.2 TRIM3对p53表达水平的影响 | 第44-46页 |
3.4.3 TRIM3通过p53来影响p21的启动子活性 | 第46-47页 |
3.5 小结 | 第47-48页 |
4 TRIM3对宫颈癌细胞和乳腺癌细胞增殖的影响 | 第48-59页 |
4.1 引言 | 第48页 |
4.2 仪器与试剂 | 第48-49页 |
4.2.1 仪器 | 第48页 |
4.2.2 试剂 | 第48页 |
4.2.3 菌种、细胞和质粒 | 第48-49页 |
4.3 实验方法 | 第49-52页 |
4.3.1 细胞培养 | 第49页 |
4.3.2 细胞转染 | 第49页 |
4.3.3 PCR钓取目的蛋白 | 第49-50页 |
4.3.4 MTT实验检测细胞增殖 | 第50页 |
4.3.5 克隆形成实验检测细胞增殖 | 第50页 |
4.3.6 划痕实验检测细胞迁移能力 | 第50页 |
4.3.7 总RNA提取 | 第50-51页 |
4.3.8 逆转录实验获得cDNA | 第51页 |
4.3.9 流式细胞术检测细胞周期 | 第51-52页 |
4.4 结果与分析 | 第52-58页 |
4.4.1 不同细胞系中TRIM3的表达情况 | 第52页 |
4.4.2 过表达TRIM3对细胞增殖能力的影响 | 第52-55页 |
4.4.3 过表达TRIM3对细胞迁移能力的影响 | 第55-56页 |
4.4.4 过表达TRIM3对细胞周期的影响 | 第56-58页 |
4.5 小结 | 第58-59页 |
结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-68页 |
攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第68-69页 |
致谢 | 第69-71页 |