| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 溶菌酶概述 | 第15页 |
| 1.2 溶菌酶分类 | 第15-16页 |
| 1.3 溶菌酶结构与功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 溶菌酶结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 溶菌酶基因与结构功能的关系 | 第17-18页 |
| 1.3.3 溶菌酶的活性中心 | 第18页 |
| 1.4 溶菌酶作用机理 | 第18-19页 |
| 1.5 溶菌酶的应用 | 第19-21页 |
| 1.5.1 溶菌酶在食品工业上的应用 | 第20页 |
| 1.5.2 溶菌酶在饲料工业上的应用 | 第20页 |
| 1.5.3 溶菌酶在医学临床上的应用 | 第20-21页 |
| 1.5.4 溶菌酶在科学研究和工程上的应用 | 第21页 |
| 1.5.5 溶菌酶的最新应用 | 第21页 |
| 1.6 重组人溶菌酶的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.6.1 人溶菌酶的优势 | 第21-22页 |
| 1.6.2 利用植物表达人溶菌酶 | 第22页 |
| 1.6.3 利用动物表达人溶菌酶 | 第22-23页 |
| 1.6.4 利用酵母表达人溶菌酶 | 第23页 |
| 1.6.5 利用大肠杆菌表达人溶菌酶 | 第23-24页 |
| 1.7 植物生物反应器 | 第24-25页 |
| 1.7.1 植物生物反应器的概念和研究现状 | 第24页 |
| 1.7.2 植物生物反应器的优势 | 第24-25页 |
| 1.8 本研究的目的、意义和主要内容 | 第25-27页 |
| 1.8.1 研究目的 | 第25-26页 |
| 1.8.2 研究意义 | 第26页 |
| 1.8.3 研究的主要内容 | 第26-27页 |
| 第二章 重组人溶菌酶在大肠杆菌中表达 | 第27-44页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第27-29页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第27页 |
| 2.1.2 酶与试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.3 激素、抗生素与培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 抗体、标品与分子量标记 | 第27-28页 |
| 2.1.5 寡核苷酸引物 | 第28页 |
| 2.1.6 人工合成基因 | 第28-29页 |
| 2.1.7 其他试剂 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-38页 |
| 2.2.1 hLYZe 大肠杆菌表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.2.2 大肠杆菌BL21 的转化 | 第32-33页 |
| 2.2.3 大肠杆菌诱导表达 | 第33页 |
| 2.2.4 表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第33-35页 |
| 2.2.5 精制包涵体的制备 | 第35-36页 |
| 2.2.6 Western blot 检测 | 第36-37页 |
| 2.2.7 包涵体的稀释复性 | 第37页 |
| 2.2.8 表达蛋白的镍亲和层析柱纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.9 重组蛋白的生物学活性检测 | 第38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-44页 |
| 2.3.1 hLYZe 大肠杆菌表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.2 大肠杆菌BL21 的转化 | 第40-41页 |
| 2.3.3 大肠杆菌的诱导表达与电泳检测 | 第41页 |
| 2.3.4 Western blot 检测 | 第41-42页 |
| 2.3.5 大肠杆菌表达hLYZ 的活性测定 | 第42-44页 |
| 第三章 重组人溶菌酶在毕赤酵母中表达 | 第44-60页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第44页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第44页 |
| 3.1.2 抗生素与培养基 | 第44页 |
| 3.1.3 其他试剂 | 第44页 |
| 3.2 方法 | 第44-52页 |
| 3.2.1 hLYZ 毕赤酵母表达载体的构建 | 第44-48页 |
| 3.2.2 毕赤酵母的转化 | 第48-50页 |
| 3.2.3 毕赤酵母的诱导表达 | 第50-51页 |
| 3.2.4 表达产物的SDS-PAGE 电泳检测 | 第51页 |
| 3.2.5 Western Blot 检测 | 第51页 |
| 3.2.6 酵母表达人溶菌酶的纯化 | 第51页 |
| 3.2.7 Bradford 法测定人溶菌酶的浓度 | 第51-52页 |
| 3.2.8 酵母表达人溶菌酶的活性测定 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.3.1 hLYZ 毕赤酵母表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2 毕赤酵母的转化 | 第54-55页 |
| 3.3.3 毕赤酵母的诱导表达与电泳检测 | 第55-56页 |
| 3.3.4 Western blot 检测 | 第56-57页 |
| 3.3.5 hLYZ 的纯化与浓度测定 | 第57-58页 |
| 3.3.6 hLYZ 的活性测定 | 第58-60页 |
| 第四章 重组人溶菌酶在拟南芥中表达 | 第60-73页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第60页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第60页 |
| 4.1.3 激素、抗生素与培养基 | 第60页 |
| 4.1.4 人工合成基因 | 第60-61页 |
| 4.1.5 其他试剂 | 第61页 |
| 4.2 方法 | 第61-68页 |
| 4.2.1 植物油体表达载体的构建 | 第61-64页 |
| 4.2.2 工程农杆菌的制备 | 第64-65页 |
| 4.2.3 拟南芥的遗传转化 | 第65-67页 |
| 4.2.4 转基因拟南芥PCR 检测 | 第67-68页 |
| 4.3 结果与分析 | 第68-73页 |
| 4.3.1 拟南芥油体表达特异载体的构建 | 第68-70页 |
| 4.3.2 工程农杆菌的制备 | 第70-71页 |
| 4.3.3 卡那霉素(Kan)筛选压的确定 | 第71页 |
| 4.3.4 拟南芥遗传转化 | 第71-72页 |
| 4.3.5 Kan 抗性拟南芥的PCR 检测 | 第72-73页 |
| 第五章 讨论 | 第73-79页 |
| 5.1 密码子优化 | 第73页 |
| 5.2 植物双元表达载体在实现marker-free 策略中的意义 | 第73-75页 |
| 5.3 植物油体表达系统的优势 | 第75-76页 |
| 5.4 本研究在拟南芥表达中存在的问题 | 第76页 |
| 5.5 毕赤酵母表达系统的特点 | 第76-77页 |
| 5.6 酵母表达载体pPICZ?-hLYZ 的构建 | 第77页 |
| 5.7 hLYZ 在毕赤酵母中的表达 | 第77页 |
| 5.8 hLYZ 在大肠杆菌中的表达 | 第77-79页 |
| 第六章 小结 | 第79-80页 |
| 附录 实验涉及的试剂和培养基配方 | 第80-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
