| 致谢 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 前言 | 第9-11页 |
| 1.课题研究的背景及意义 | 第9-10页 |
| 2.课题拟解决的问题及研究目的 | 第10页 |
| 3.本论文主要研究内容 | 第10页 |
| 4.本论文的主要创新点 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 半纤维素和木聚糖 | 第11页 |
| 1.2 木聚糖的微生物降解 | 第11-12页 |
| 1.3 乙酰木聚糖酯酶 | 第12-16页 |
| 1.3.1 乙酰木聚糖酯酶的发现 | 第12-13页 |
| 1.3.2 乙酰木聚糖酯酶的基因家族及产酶微生物 | 第13-15页 |
| 1.3.3 乙酰木聚糖酯酶研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.4 乙酰木聚糖酯酶的底物专一性 | 第16页 |
| 1.4 草菇 | 第16-17页 |
| 1.5 PCR 扩增法基因合成 | 第17-19页 |
| 1.5.1 PCR 合成法的引物设计 | 第17-18页 |
| 1.5.2 PCR 基因合成的方法 | 第18-19页 |
| 1.6 酵母表达体系 | 第19-22页 |
| 1.6.1 巴斯德毕赤酵母 | 第19-20页 |
| 1.6.2 毕赤酵母的表达载体 | 第20-21页 |
| 1.6.3 外源蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第21-22页 |
| 第二章 乙酰木聚糖酯酶全基因的人工合成及其在毕赤酵母中的表达 | 第22-41页 |
| 2.1 材料 | 第22-24页 |
| 2.1.1 菌种 | 第22页 |
| 2.1.2 质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 药品 | 第22页 |
| 2.1.4 工具酶 | 第22页 |
| 2.1.5 仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.6 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24-26页 |
| 2.2.2 PCR 核心模板法合成乙酰木聚糖酯酶全基因 AXE | 第26-29页 |
| 2.2.3 合成的基因 AXE 与质粒载体pGEM-T 的连接 | 第29页 |
| 2.2.4 重组质粒pGEMT-AXE 转化到大肠杆菌中 | 第29-30页 |
| 2.2.5 重组质粒pGEMT-AXE 的筛选 | 第30-31页 |
| 2.2.6 测序分析 | 第31页 |
| 2.2.7 少量质粒提取 | 第31页 |
| 2.2.8 重组质粒pPICZαA-AXE 的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.9 筛选重组质粒pPICZαA-AXE 的阳性克隆 | 第32页 |
| 2.2.10 大量质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.2.11 酵母的电击转化 | 第33-34页 |
| 2.2.12 重组表达菌株的筛选 | 第34页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第34-38页 |
| 2.3.1 乙酰木聚糖酯酶全基因AXE 的合成 | 第34-36页 |
| 2.3.2 重组质粒 pGEMT-AXE 的筛选 | 第36页 |
| 2.3.3 测序分析 | 第36-37页 |
| 2.3.4 重组质粒pPICZαA-AXE 的 Sac Ι酶切 | 第37页 |
| 2.3.5 重组表达菌株的筛选 | 第37-38页 |
| 2.4 小节 | 第38-41页 |
| 第三章 乙酰木聚糖酯酶产酶情况及酶学性质研究 | 第41-70页 |
| 3.1 材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 菌种 | 第41页 |
| 3.1.2 药品 | 第41页 |
| 3.1.3 缓冲液 | 第41-42页 |
| 3.1.4 试剂盒 | 第42页 |
| 3.1.5 培养基 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-51页 |
| 3.2.1 重组酵母工程菌的表达 | 第42-43页 |
| 3.2.2 酵母表达体系表达条件的优化 | 第43-44页 |
| 3.2.3 酶的分离纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 聚丙烯酰铵凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第45-47页 |
| 3.2.5 乙酰木聚糖酯酶酶活的测定 | 第47-48页 |
| 3.2.6 酶动力学参数测定 | 第48页 |
| 3.2.7 底物专一性研究 | 第48-50页 |
| 3.2.8 内切糖苷酶酶切试验 | 第50-51页 |
| 3.2.9 吸附试验 | 第51页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第51-65页 |
| 3.3.1 酵母的诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.3.2 酵母表达体系表达条件的优化 | 第52-57页 |
| 3.3.3 酶的分离纯化 | 第57-58页 |
| 3.3.4 酶活的测定 | 第58-61页 |
| 3.3.5 酶动力学参数测定 | 第61-62页 |
| 3.3.6 底物专一性研究 | 第62-63页 |
| 3.3.7 内切糖苷酶酶切试验 | 第63-64页 |
| 3.3.8 吸附试验 | 第64-65页 |
| 3.4 小节 | 第65-70页 |
| 总结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
