| 中文摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 英文缩略词表 | 第20-22页 |
| 引言 | 第22-28页 |
| 第一部分 建立TNMⅢ期大肠癌与癌旁组织的差异蛋白谱 | 第28-48页 |
| 1 二维色谱与质谱联用实验 | 第28-31页 |
| 1.1 主要试剂 | 第28页 |
| 1.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 1.3 临床组织样本取材 | 第29页 |
| 1.4 提取组织样本的总蛋白质及分析蛋白质浓度 | 第29页 |
| 1.5 制备组织样本的蛋白质酶解多肽混合物 | 第29-30页 |
| 1.6 二维色谱与质谱联用技术进行检测分析和数据库检索 | 第30-31页 |
| 2 免疫蛋白印记实验 | 第31-35页 |
| 2.1 主要试剂 | 第31页 |
| 2.2 主要试剂的配制 | 第31-32页 |
| 2.3 主要仪器 | 第32页 |
| 2.4 标本准备 | 第32-33页 |
| 2.5 丙烯凝胶电泳(SDS‐PAGE) | 第33-34页 |
| 2.6 转膜 | 第34页 |
| 2.7 加抗体 | 第34-35页 |
| 2.8 压片 | 第35页 |
| 3 实验结果 | 第35-44页 |
| 3.1 大肠癌组织的鉴定数据 | 第35页 |
| 3.2 癌旁肠粘膜组织的鉴定数据 | 第35页 |
| 3.3 质谱分析大肠癌组织与配对癌旁组织差异蛋白质 | 第35-40页 |
| 3.4 上调蛋白PDIA3鉴定质谱数据 | 第40-44页 |
| 3.5 PDIA3蛋白免疫印记图 | 第44页 |
| 4 小结 | 第44页 |
| 5 讨论 | 第44-48页 |
| 第二部分 大肠癌病人PDIA3表达与临床病理参数之间的关系 | 第48-58页 |
| 1 材料与仪器 | 第48-49页 |
| 1.1 组织标本 | 第48页 |
| 1.2 主要仪器 | 第48页 |
| 1.3 试剂 | 第48-49页 |
| 2 实验方法 | 第49-52页 |
| 2.1 建立临床病理资料数据库 | 第49-50页 |
| 2.2 石蜡标本的制作过程 | 第50-51页 |
| 2.3 免疫组织化学染色的具体步骤 | 第51-52页 |
| 2.4 免疫组化结果的判定标准 | 第52页 |
| 2.5 分析PDIA3表达与临床病理参数之间的关系 | 第52页 |
| 2.6 统计学分析 | 第52页 |
| 3 结果 | 第52-55页 |
| 3.1 大肠癌组织与配对肠粘膜组织中PDIA3的表达情况 | 第52-53页 |
| 3.2 PDIA3蛋白在大肠癌组织与配对癌旁肠粘膜组织表达的差异 | 第53-54页 |
| 3.3 大肠癌病人PDIA3表达水平与临床病理学特征的关系 | 第54-55页 |
| 4 小结 | 第55页 |
| 5 讨论 | 第55-58页 |
| 第三部分 PDIA3基因在大肠癌细胞株中的表达及功能研究 | 第58-86页 |
| 第一章 PDIA3蛋白在大肠癌细胞株中的表达 | 第58-63页 |
| 1 材料和仪器 | 第58-59页 |
| 1.1 主要仪器 | 第58页 |
| 1.2 主要试剂 | 第58-59页 |
| 2 实验方法 | 第59-61页 |
| 2.1 细胞培养 | 第59-60页 |
| 2.2 免疫荧光染色 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-63页 |
| 3.1 光镜下SW480的形态特征 | 第61页 |
| 3.2 免疫荧光结果 | 第61-63页 |
| 第二章 PDIA3 SIRNA 表达载体的构建和质粒扩增 | 第63-68页 |
| 1 材料和仪器 | 第63页 |
| 1.1 主要仪器 | 第63页 |
| 1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 2 实验步骤及方法 | 第63-66页 |
| 2.1 表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 2.2 提取质粒 | 第64-65页 |
| 2.3 转染 | 第65-66页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第65页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-68页 |
| 3.1 测定质粒的浓度 | 第66页 |
| 3.2 观察 | 第66-68页 |
| 第三章 RNA干扰对SW480细胞PDIA3基因转录的影响 | 第68-74页 |
| 1 材料与仪器 | 第68页 |
| 1.1 主要仪器 | 第68页 |
| 1.2 主要试剂 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| 2.1 细胞总RNA分离 | 第68-69页 |
| 2.2 逆转录（cDNA的合成） | 第69-70页 |
| 2.3 Real‐Time PCR | 第70-71页 |
| 3 统计学方法 | 第71页 |
| 4 结果 | 第71-74页 |
| 4.1 分离细胞总RNA | 第71-72页 |
| 4.2 PDIA3 siRNA转染对SW480细胞PDIA3 mRNA转录的影响 | 第72-74页 |
| 第四章 RNA干扰对SW480细胞凋亡的影响 | 第74-77页 |
| 1 材料与仪器 | 第74页 |
| 1.1 主要仪器 | 第74页 |
| 1.2 主要试剂 | 第74页 |
| 2 实验方法 | 第74-75页 |
| 2.1 实验分组 | 第74页 |
| 2.2 凋亡检测 | 第74-75页 |
| 3 统计学方法 | 第75页 |
| 4 结果 | 第75-77页 |
| 第五章 RNA干扰对SW480细胞亚结构的改变 | 第77-80页 |
| 1 材料和仪器 | 第77页 |
| 1.1 主要设备 | 第77页 |
| 1.2 主要试剂 | 第77页 |
| 2 实验方法 | 第77-78页 |
| 2.1 光镜标本的制作 | 第77-78页 |
| 2.2 电镜样本制作 | 第78页 |
| 3 结果 | 第78-80页 |
| 3.1 PDIA3 siRNA载体转染后，SW480细胞光镜下形态改变 | 第78-79页 |
| 3.2 PDIA3 siRNA转染后对SW480的亚细胞结构电镜下的改变 | 第79-80页 |
| 第六章 RNA干扰对SW480细胞增殖的影响 | 第80-86页 |
| 1 材料和仪器 | 第80页 |
| 1.1 主要仪器 | 第80页 |
| 1.2 主要试剂 | 第80页 |
| 2 实验方法 | 第80页 |
| 3 统计学分析 | 第80-81页 |
| 4 结果 | 第81-82页 |
| 4.1 按浓度分别转染PDIA3 siRNA载体对SW480细胞活性的影响 | 第81页 |
| 4.2 不同时间点转染PDIA3 siRNA载体对SW480细胞活性的影响 | 第81-82页 |
| 小结 | 第82页 |
| 讨论 | 第82-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 文献综述 | 第87-93页 |
| 参考文献 | 第93-106页 |
| 作者简介 | 第106-107页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
