| 中文摘要 | 第5-8页 |
| 英文摘要 | 第8-11页 |
| 第一部分 Smads蛋白在TGF-β_1体外诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化中的作用 | 第12-51页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 实验材料 | 第14-18页 |
| 一、细菌菌株及质粒载体 | 第14-16页 |
| 二、质粒构建所需的酶以及其它试剂 | 第16页 |
| 三、PCR扩增引物 | 第16-17页 |
| 四、细胞系及细胞培养 | 第17页 |
| 五、细胞因子其他试剂及试剂盒 | 第17页 |
| 六、主要仪器 | 第17-18页 |
| 实验方法 | 第18-33页 |
| 一、TGF-β_1在体外诱导肺成纤维细胞向肺肌成纤维细胞分化 | 第18-23页 |
| 二、含人a-SMA基因启动子序列的荧光素酶报告基因质粒的构建与鉴定 | 第23-27页 |
| 三、pCS_2-Smad2~(mut)表达质粒的构建与鉴定 | 第27-30页 |
| 四、Smads蛋白在TGF-β_1诱导人a-SMA基因启动子活性的影响 | 第30-32页 |
| 五、Smads蛋白在TGF-β_1诱导人a-SMA基因蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| 六、统计学处理 | 第33页 |
| 结果 | 第33-45页 |
| 一、TGF-β_1能在体外诱导肺成纤维细胞向肺肌成纤维细胞分化 | 第33-35页 |
| 二、质粒的酶切和测序鉴定 | 第35-40页 |
| 1、含人a-SMA基因启动子序列的荧光素酶报告基因质粒p895-Luc的成功构建 | 第35页 |
| 2、pCS_2-Smad2~(mut)表达质粒的成功构建 | 第35页 |
| 3、其它质粒的鉴定 | 第35-40页 |
| 三、p895-Luc荧光素酶活性的检测 | 第40页 |
| 四、Smads在TGF-β_1诱导人a-SMA基因表达的作用 | 第40-45页 |
| 1、Smad3在TGF-β-1诱导人a-SMA基因表达的作用 | 第40-42页 |
| 2、Smad2在TGF-β_1诱导人a-SMA基因表达的作用 | 第42-43页 |
| 3、Smad7在TGF-β_1诱导人a-SMA基因表达的作用 | 第43-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-51页 |
| 第二部分 Smad3对博莱霉素诱导肺维化模型中肌成纤维细胞分化的作用 | 第51-75页 |
| 前言 | 第51-52页 |
| 实验材料 | 第52-54页 |
| 一、实验动物 | 第52-53页 |
| 二、主要仪器和试剂 | 第53-54页 |
| 实验方法 | 第54-58页 |
| 一、博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型的制作 | 第54-55页 |
| 二、动物分组 | 第55页 |
| 三、观察项目 | 第55页 |
| 四、动物处理 | 第55页 |
| 五、检测指标 | 第55-57页 |
| 1、肺组织羟脯氨酸含量的测定 | 第55-56页 |
| 2、肺组织切片染色 | 第56-57页 |
| 3、Western blot定量分析肺组织α-SMA的表达 | 第57页 |
| 六、统计学处理 | 第57-58页 |
| 结果 | 第58-67页 |
| 一、动物的一般情况 | 第58页 |
| 二、肺组织的病理学改变 | 第58-65页 |
| 三、肺组织羟脯氨酸含量变化 | 第65-66页 |
| 四、肺组织α-SMA的蛋白表达 | 第66-67页 |
| 讨论 | 第67-70页 |
| 小结 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 第三部分 干扰素-γ、地塞米松对TGF-β_1诱导肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的影响 | 第75-92页 |
| 前言 | 第75-76页 |
| 实验材料 | 第76-77页 |
| 一、细胞系及细胞培养 | 第76页 |
| 二、主要仪器和试剂 | 第76-77页 |
| 实验方法 | 第77-81页 |
| 一、Western blot | 第77-79页 |
| 二、细胞免疫荧光法 | 第79页 |
| 三、细胞免疫化学法 | 第79-80页 |
| 四、羟脯氨酸的测定 | 第80-81页 |
| 五、RT-PCR检测胶原Ⅰ和Ⅲ mRNA的表达 | 第81页 |
| 六、统计学处理 | 第81页 |
| 结果 | 第81-87页 |
| 一、IFN-γ和DEX对α-SMA表达的影响 | 第81-83页 |
| 二、IFN-γ和DEX对细胞形态的影响 | 第83页 |
| 三、IFN-γ和Dex对胶原合成的影响 | 第83-85页 |
| 四、IFN-γ对TGF-β_1／Smads信号途径的影响 | 第85-87页 |
| 1、IFN-γ不影响Smad2／3和Smad7内源行性表达 | 第85页 |
| 2、IFN-γ不抑制Smad2／3磷酸化和细胞核转位 | 第85-87页 |
| 讨论 | 第87-88页 |
| 小结 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-92页 |
| 综述一 | 第92-115页 |
| 综述二 | 第115-124页 |
| 附录1 主要溶液的配制 | 第124-129页 |
| 附录2 缩略语表 | 第129-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
