| 摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 天然产物的生物合成和代谢工程 | 第12-16页 |
| 1.2 四氢异喹啉家族生物碱的研究背景 | 第16-21页 |
| 1.2.1 萘啶霉素 | 第16-18页 |
| 1.2.2 番红霉素A | 第18页 |
| 1.2.3 番红菌素B | 第18-19页 |
| 1.2.4 ET-743 | 第19-21页 |
| 1.3 立题背景 | 第21-23页 |
| 1.3.1 萘啶霉素 | 第22页 |
| 1.3.2 番红菌素B | 第22-23页 |
| 1.4 研究思路 | 第23-25页 |
| 第2章 材料与方法 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器与试剂 | 第25-29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-40页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第29-30页 |
| 2.2.2 链霉菌孢子的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.3 基因组DNA的制备 | 第31页 |
| 2.2.4 S. lavendulae NRRL11002和E. coli S17-1的属间接合转移 | 第31-32页 |
| 2.2.5 S. lusitanus NRRL 8034和E.coli S17-1的属间接合转移 | 第32页 |
| 2.2.6 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第32-33页 |
| 2.2.7 PCR产物的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.8 序列分析 | 第34页 |
| 2.2.9 PCR-targeting技术(Red-ET基因打靶) | 第34-35页 |
| 2.2.10 链霉菌S. lavendulae NRRL11002的发酵及检测 | 第35-36页 |
| 2.2.11 链霉菌S. lusitanus NRRL 8034的发酵及检测 | 第36页 |
| 2.2.12 蛋白的体外表达和纯化 | 第36-40页 |
| 第3章 结果与分析 | 第40-65页 |
| 3.1 萘啶霉素生物合成机制研究 | 第40-55页 |
| 3.1.1 萘啶霉素生物合成基因簇上游边界确定 | 第41-49页 |
| 3.1.2 NptM2的功能研究 | 第49-55页 |
| 3.2 番红菌素中两个甲基转移酶SfcF,SfcG的表达纯化及酶活性的检测 | 第55-65页 |
| 3.2.1 重组表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.2.2 蛋白的表达与纯化 | 第56-57页 |
| 3.2.3 蛋白的活性检测 | 第57-62页 |
| 3.2.4 碳甲基转移酶SfcF的酶活反应时间曲线及酶动力学常数测试 | 第62-65页 |
| 第4章 讨论 | 第65-66页 |
| 4.1 萘啶霉素生物合成基因簇的上游边界确定 | 第65页 |
| 4.2 NptM2的基因功能研究 | 第65页 |
| 4.3 番红菌素中两个甲基转移酶的研究 | 第65-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间学术论文目录 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
