| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 前言 | 第8-12页 |
| 材料与方法 | 第12-21页 |
| 1 材料 | 第12-14页 |
| 1.1 病毒、菌种质粒 | 第12页 |
| 1.1.1 重组腺病毒 | 第12页 |
| 1.1.2 pcDNA3.1(+)质粒 | 第12页 |
| 1.1.3 大肠杆菌DH5α | 第12页 |
| 1.1.4 pGEM-T质粒 | 第12页 |
| 1.2 酶、主要试剂和仪器 | 第12-13页 |
| 1.2.1 酶和主要购买试剂 | 第12-13页 |
| 1.2.2 自配试剂 | 第13页 |
| 1.2.3 仪器 | 第13页 |
| 1.3 细胞、培养基及培养条件 | 第13-14页 |
| 1.3.1 人胚胎肾细胞293 | 第13-14页 |
| 1.3.2 人肝癌细胞株QGY-7703 | 第14页 |
| 1.3.3 抗生素与浓度 | 第14页 |
| 2. 方法 | 第14-21页 |
| 2.1 pcDNA3.1(+)-spink6质粒的构建 | 第14页 |
| 2.2 重组腺病毒pAd-spink6及空病毒pAd-GFP滴度测定 | 第14-15页 |
| 2.3 pcDNA3.1(+)-spink6质粒转染细胞及SPINK6基因过表达的荧光定量PCR检测 | 第15页 |
| 2.4 腺病毒感染细胞及SPINK6基因过表达的荧光定量PCR检测 | 第15页 |
| 2.5 CCK8检测细胞生长曲线 | 第15-16页 |
| 2.5.1 质粒转染细胞生长曲线 | 第15-16页 |
| 2.5.2 重组腺病毒感染细胞生长曲线 | 第16页 |
| 2.6 软琼脂克隆形成实验 | 第16页 |
| 2.7 细胞划痕实验 | 第16页 |
| 2.8 细胞浸润迁移Transwell实验 | 第16页 |
| 2.9 常用分子生物学方法 | 第16-19页 |
| 2.9.1 3S柱离心式质粒小量快速抽提法 | 第16-17页 |
| 2.9.2 酶切以及质粒片段的连接 | 第17-18页 |
| 2.9.3 电泳、胶回收 | 第18页 |
| 2.9.4 E.coli DH5α的感受态制作、菌种保存和CaCl2法转化 | 第18页 |
| 2.9.5 PCR反应体系(20μL体系) | 第18-19页 |
| 2.10 常用细胞学实验方法 | 第19-21页 |
| 2.10.1 细胞复苏 | 第19页 |
| 2.10.2 细胞传代培养 | 第19页 |
| 2.10.3 细胞冻存 | 第19页 |
| 2.10.4 质粒转染细胞 | 第19-21页 |
| 结果 | 第21-54页 |
| 1 pcDNA3.1(+)-spink6质粒对肝脏肿瘤细胞QGY-7703的抑制 | 第21-41页 |
| 1.1 pcDNA3.1(+)-spink6质粒的构建 | 第21-23页 |
| 1.1.1 pcDNA3.1(+)-spink6的双酶切及PCR鉴定结果 | 第21-22页 |
| 1.1.2 pcDNA3.1(+)-spink6的测序结果 | 第22-23页 |
| 1.2 pcDNA3.1(+)-spink6质粒转染细胞及SPINK6基因过表达的荧光定量PCR检测 | 第23-24页 |
| 1.3 质粒转染细胞生长曲线 | 第24页 |
| 1.4 质粒转染细胞的软琼脂克隆形成实验 | 第24-27页 |
| 1.5 质粒转染细胞的划痕实验 | 第27页 |
| 1.6 质粒转染细胞的Transwell实验 | 第27-41页 |
| 2 重组腺病毒pAd-spink6对肝脏肿瘤细胞QGY-7703的抑制 | 第41-54页 |
| 2.1 腺病毒病毒滴度测定 | 第41-42页 |
| 2.2 病毒感染细胞及SPINK6基因过表达的荧光定量PCR检测 | 第42-44页 |
| 2.3 病毒感染细胞生长曲线 | 第44页 |
| 2.4 病毒感染细胞的软琼脂克隆形成实验 | 第44-47页 |
| 2.5 病毒感染细胞的划痕实验 | 第47-48页 |
| 2.6 病毒感染细胞的Transwell实验 | 第48-54页 |
| 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 论文发表情况 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
