| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 手足口病简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 手足口病临床症状及流行病学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 科萨奇病毒A16病毒学 | 第13-14页 |
| 1.1.3 手足口病的治疗预防 | 第14-15页 |
| 1.2 优化方法简介及选择 | 第15-16页 |
| 1.2.1 同义密码子优化 | 第15页 |
| 1.2.2 启动子替换 | 第15-16页 |
| 1.2.3 基因序列 3CD替换 | 第16页 |
| 1.3 昆虫表达系统介绍 | 第16-18页 |
| 1.3.1 表达系统Bac-to-Bac | 第16-18页 |
| 1.3.2 质粒载体pFastBacTM Dual | 第18页 |
| 1.4 立题依据及实验设计思路 | 第18-22页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第18-19页 |
| 1.4.2 实验设计思路 | 第19-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-27页 |
| 2.1.1 常用仪器及试剂 | 第22-24页 |
| 2.1.2 病毒及细胞系 | 第24-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 不同优化方式质粒的构建及杆状质粒的获得 | 第27-29页 |
| 2.2.2 不同优化方式重组杆状病毒的获得及扩增 | 第29-30页 |
| 2.2.3 不同优化方式VLP蛋白的表达条件摸索 | 第30-31页 |
| 2.2.4 不同优化方式VLP蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 不同优化方式VLP蛋白的表征及定量 | 第32-35页 |
| 2.2.6 免疫策略的制定 | 第35-36页 |
| 2.2.7 抗体效价的评估 | 第36-37页 |
| 2.2.8 CA16活病毒的获得 | 第37-38页 |
| 2.2.9 CA16病毒的氯化铯纯化及灭活方法 | 第38-40页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第40-64页 |
| 3.1 不同优化方法质粒的构建及杆状质粒获得 | 第41-53页 |
| 3.1.1 P1opt/ori-3CD -PFD构建 | 第42-45页 |
| 3.1.2 P1opt/ori-BJ3CD-PFD构建 | 第45-47页 |
| 3.1.3 P1opt/ori-ECMV-BJ3CD-PFD构建 | 第47-51页 |
| 3.1.4 相应优化杆粒M13PCR验证 | 第51-53页 |
| 3.2 昆虫系统表达不同优化的CA16VLP蛋白 | 第53-55页 |
| 3.3 CA16VLP蛋白定量检测 | 第55-57页 |
| 3.3.1 超声上清及分泌上清10倍浓缩处理 | 第55页 |
| 3.3.2 胞內及分泌VLP含量检测 | 第55-57页 |
| 3.4 CA16 VLP蛋白纯化及表征 | 第57-60页 |
| 3.4.1 SDS-PAGE和Western Blot | 第58页 |
| 3.4.2 DLS及TEM检测 | 第58-60页 |
| 3.5 动物免疫实验 | 第60页 |
| 3.6 免疫血清CA16特异性IgG抗体检测 | 第60-61页 |
| 3.7 免疫血清中和抗体检测 | 第61-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-70页 |
| 作者简介及科研成果 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
