| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 一 引言 | 第11-15页 |
| 1.1 模式生物介绍 | 第11页 |
| 1.2 锌在动植物中的作用及资源现状 | 第11-12页 |
| 1.3 锌离子转运蛋白的研究进展及监测方法 | 第12-14页 |
| 1.3.1 动植物中锌离子转运蛋白的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3.2 目前常用的锌离子监测手段 | 第13-14页 |
| 1.4 目的蛋白的定位 | 第14-15页 |
| 1.4.1 基于绿色荧光蛋白GFP定位目的蛋白 | 第14页 |
| 1.4.2 基于免疫荧光定位目的蛋白 | 第14-15页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第15页 |
| 二 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第15-16页 |
| 2.1.2 菌种及质粒 | 第16页 |
| 2.1.3 细胞材料 | 第16页 |
| 2.2 实验试剂 | 第16页 |
| 2.3 实验试剂的配制 | 第16-17页 |
| 2.4 引物列表 | 第17-18页 |
| 2.5 实验方法 | 第18-27页 |
| 2.5.1 ZNE1缺失突变体表型分析 | 第18页 |
| 2.5.2 ZNE1互补材料的筛选与表形鉴定 | 第18-22页 |
| 2.5.2.1 利用CTAB DNA提取液提取拟南芥Col-0基因组DNA | 第18-19页 |
| 2.5.2.2 拟南芥总RNA的提取及反转录形成cDNA | 第19-20页 |
| 2.5.2.3 ZNE1-pORE O4融合载体的构建 | 第20-21页 |
| 2.5.2.4 根癌农杆菌侵染拟南芥花絮及阳性苗的筛选 | 第21-22页 |
| 2.5.2.5 互补材料的表形鉴定 | 第22页 |
| 2.5.3 ZNE1烟草瞬时表达 | 第22-25页 |
| 2.5.3.1 ZNE1基因克隆与克隆载体的连接 | 第22-23页 |
| 2.5.3.2 阳性克隆的筛选 | 第23-24页 |
| 2.5.3.3 ZNE1-GFP融合质粒的构建 | 第24页 |
| 2.5.3.4 电击法转化农杆菌感受态 | 第24-25页 |
| 2.5.3.5 农杆菌介导烟草叶片的瞬时表达 | 第25页 |
| 2.5.4 HEK 293T瞬时表达ZVE1免疫荧光定位 | 第25-27页 |
| 2.5.4.1 HEK 293T的复苏与传代 | 第25-26页 |
| 2.5.4.2 HEK 293T细胞转染 | 第26页 |
| 2.5.4.3 HEK 293T细胞免疫荧光 | 第26-27页 |
| 2.5.5 利用荧光染料检测Zn~(2+)在拟南芥叶片中的分布 | 第27页 |
| 三 结果与分析 | 第27-33页 |
| 3.1 ZNE1突变体具有高锌敏感表型 | 第27-28页 |
| 3.2 ZNE1突变体互补材料的表型鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 ZNE1烟草表皮细胞瞬时表达与不同细胞器的共定位 | 第29-31页 |
| 3.4 ZNE1瞬时转染HEK 293T免疫荧光定位 | 第31-32页 |
| 3.5 不同浓度Zn~(2+)处理下Col-0、zne1-1、zne1-2叶中Zn~(2+)分布情况 | 第32-33页 |
| 四 讨论 | 第33-36页 |
| 参考文献 | 第36-41页 |
| 致谢 | 第41页 |
