| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1 引言 | 第14-32页 |
| 1.1 冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展 | 第14-26页 |
| 1.1.1 冠状病毒的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.2 冠状病毒基因组结构特点 | 第15-18页 |
| 1.1.3 冠状病毒基因组功能 | 第18-24页 |
| 1.1.4 冠状病毒相关受体结构和功能 | 第24-26页 |
| 1.2 鸡传染性支气管炎研究进展 | 第26-29页 |
| 1.2.1 鸡传染性支气管炎的流行病学 | 第26-27页 |
| 1.2.2 鸡传染性支气管炎的临床症状和病理机制 | 第27-29页 |
| 1.2.3 鸡传染性支气管炎的诊治 | 第29页 |
| 1.3 噬菌体展示技术的研究进展 | 第29-31页 |
| 1.3.1 噬菌体展示技术概述 | 第29页 |
| 1.3.2 模拟病毒蛋白表位 | 第29-30页 |
| 1.3.3 病毒作用机制的研究 | 第30页 |
| 1.3.4 在新型疫苗研制方面的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第32-35页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 2.1.2 菌种、载体及质粒 | 第32页 |
| 2.1.3 工具酶、试剂盒和抗体试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 标准参照物 | 第32-33页 |
| 2.1.5 实验试剂的配制 | 第33-34页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-56页 |
| 2.2.1 IBV S1基因的克隆及原核表达质粒的构建 | 第35-39页 |
| 2.2.2 IBV S1基因的原核表达及鉴定 | 第39-40页 |
| 2.2.3 噬菌体随机十二肽库对S1重组蛋白亲和配体的生物淘选 | 第40-43页 |
| 2.2.4 噬菌体结合克隆的特征鉴定、序列测定及多肽合成 | 第43-45页 |
| 2.2.5 S1蛋白亲和多肽的体外抗病毒活性检测 | 第45-46页 |
| 2.2.6 荧光标记S1蛋白亲和多肽对IBV感染雏鸡组织内病毒的检测 | 第46-47页 |
| 2.2.7 IBV检测方法的建立 | 第47-49页 |
| 2.2.8 gAPN基因的克隆及原核表达 | 第49-50页 |
| 2.2.9 gAPN重组蛋白的纯化、多抗制备及活性鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.10 gAPN真核表达质粒的构建及转染 | 第51-52页 |
| 2.2.11 S1蛋白与gAPN蛋白的亲和鉴定 | 第52-53页 |
| 2.2.12 gAPN多克隆抗体对IBV感染CEK细胞的阻断 | 第53-54页 |
| 2.2.13 gAPN介导IBV感染Hela细胞 | 第54-55页 |
| 2.2.14 gAPN的生物信息学分析 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-99页 |
| 3.1 IBV S1基因的克隆及原核表达质粒的构建 | 第56-58页 |
| 3.1.1 IBV S1基因的RT-PCR扩增 | 第56页 |
| 3.1.2 S1基因重组原核表达质粒的构建及鉴定 | 第56-58页 |
| 3.2. S1重组蛋白的表达及鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2.1 S1重组蛋白的表达 | 第58页 |
| 3.2.2 S1重组蛋白的Western blot鉴定 | 第58-59页 |
| 3.3 噬菌体十二肽库对S1重组蛋白亲和配体的生物淘选 | 第59-78页 |
| 3.3.1 S1重组蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| 3.3.2 噬菌体十二肽库对靶分子的四轮淘洗 | 第60-62页 |
| 3.3.3 S1蛋白亲和多肽的抗病毒活性检测 | 第62-63页 |
| 3.3.4 荧光标记S1蛋白亲和多肽对IBV感染雏鸡组织内病毒的检测 | 第63-75页 |
| 3.3.5 IBV检测方法的建立 | 第75-78页 |
| 3.4 gAPN的原核表达、多抗制备及生物学功能的研究 | 第78-82页 |
| 3.4.1 gAPN基因的克隆 | 第78-80页 |
| 3.4.2 gAPN基因的原核表达 | 第80-81页 |
| 3.4.3 gAPN多克隆血清制备及生物学功能的测定 | 第81-82页 |
| 3.5 gAPN真核表达质粒的构建和瞬时转染 | 第82-84页 |
| 3.5.1 gAPN真核表达质粒的构建 | 第82-83页 |
| 3.5.2 gAPN真核表达质粒的的转染 | 第83-84页 |
| 3.6 S1蛋白与gAPN蛋白的亲和鉴定 | 第84-87页 |
| 3.6.1 S1蛋白亲和噬菌体与gAPN蛋白的竞争ELISA | 第84-85页 |
| 3.6.2 S1蛋白亲和噬菌体与gAPN多抗的间接ELISA | 第85页 |
| 3.6.3 原核表达gAPN蛋白与IBV的Western blot鉴定 | 第85-86页 |
| 3.6.4 IBV S1蛋白和gAPN蛋白的免疫共沉淀 | 第86-87页 |
| 3.7 gAPN多克隆抗体阻断IBV感染CKE细胞 | 第87-89页 |
| 3.7.1 gAPN多抗阻断IBV感染CEK细胞的Real-time PCR检测 | 第87-88页 |
| 3.7.2 gAPN多克隆抗体阻断IBV感染CEK细胞的病变观察 | 第88-89页 |
| 3.8 gAPN受体功能位点的鉴定 | 第89-96页 |
| 3.8.1 gAPN转染Hela细胞对IBV感染的影响 | 第89页 |
| 3.8.2 IBV和gAPN在BHK细胞的间接免疫荧光共定位检测 | 第89-92页 |
| 3.8.3 gAPN表达量对IBV感染Hela细胞的影响 | 第92-95页 |
| 3.8.4 gAPN对不同IBV毒株感染Hela细胞的影响 | 第95页 |
| 3.8.5 不同长度gAPN对IBV感染Hela的影响 | 第95-96页 |
| 3.9 gAPN的生物信息学分析 | 第96-99页 |
| 4 讨论 | 第99-108页 |
| 4.1 IBV S1蛋白的生物学功能 | 第99-100页 |
| 4.2 S1蛋白亲和肽的筛选及序列测定 | 第100页 |
| 4.3 IBV检测方法的建立 | 第100-101页 |
| 4.4 S1蛋白特异性标记多肽对IBV抗原分布研究 | 第101-103页 |
| 4.5 gAPN作为IBV感染细胞功能受体的鉴定 | 第103-108页 |
| 5 结论 | 第108-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-129页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第129页 |
