| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-32页 |
| 1 抗菌肽概述 | 第15页 |
| 2 抗菌肽的分类 | 第15-16页 |
| 3 抗菌肽的体外表达 | 第16-19页 |
| 3.1 原核表达系统 | 第16-18页 |
| 3.1.1 大肠杆菌表达系统 | 第16-17页 |
| 3.1.2 枯草芽孢杆菌表达系统 | 第17-18页 |
| 3.2 真核表达系统 | 第18-19页 |
| 3.2.1 酵母表达系统 | 第18页 |
| 3.2.2 杆状病毒/昆虫细胞表达系统 | 第18-19页 |
| 3.2.3 动物细胞表达系统 | 第19页 |
| 4 抗菌肽的功能 | 第19-22页 |
| 4.1 抗细菌作用 | 第19-20页 |
| 4.2 抗真菌作用 | 第20页 |
| 4.3 抗病毒作用 | 第20-21页 |
| 4.4 抗寄生虫作用 | 第21页 |
| 4.5 抗肿瘤作用 | 第21页 |
| 4.6 免疫调节作用 | 第21-22页 |
| 5 抗菌肽的应用 | 第22-27页 |
| 5.1 农业方面 | 第22-24页 |
| 5.1.1 抗病新品种的培养 | 第22-23页 |
| 5.1.2 饲料添加剂 | 第23-24页 |
| 5.1.3 生物农药 | 第24页 |
| 5.2 医药方面 | 第24-26页 |
| 5.3 食品方面 | 第26页 |
| 5.4 化妆品工业方面 | 第26-27页 |
| 6 抗菌肽的抗菌机制 | 第27-30页 |
| 6.1 抗菌肽的胞外杀菌机制 | 第27-28页 |
| 6.1.1 作用于细菌细胞膜 | 第27-28页 |
| 6.1.2 作用于非膜性胞外部靶点 | 第28页 |
| 6.2 抗菌肽的胞内杀菌机制 | 第28-30页 |
| 6.2.1 与核酸物质结合，抑制DNA复制、RNA合成 | 第29页 |
| 6.2.2 影响蛋白质的合成 | 第29页 |
| 6.2.3 抑制隔膜、细胞壁合成，阻碍细胞分裂 | 第29页 |
| 6.2.4 抑制胞内酶的活性 | 第29-30页 |
| 6.2.5 作用于线粒体 | 第30页 |
| 7 抗菌肽的结构设计与改造 | 第30-32页 |
| 7.1 以天然抗菌肽构效关系为依据的改造 | 第30-31页 |
| 7.2 以具有α-螺旋结构抗菌肽氨基酸序列为基础的改造 | 第31-32页 |
| 第二篇 研究内容 | 第32-85页 |
| 第一章 家蝇抗菌肽MDAP-2 基因的RACE扩增、克隆与序列分析 | 第32-48页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1 文库及菌株 | 第32页 |
| 1.2 试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| 2.1 MDAP-2 的RACE扩增 | 第33-34页 |
| 2.1.1 RACE引物设计与合成 | 第33页 |
| 2.1.2 RACE方法扩增MDAP-2 基因 | 第33-34页 |
| 2.1.3 RACE-PCR产物的回收与纯化 | 第34页 |
| 2.2 MDAP-25’-RACE与 3’-RACE基因片段的克隆 | 第34-36页 |
| 2.2.1 大肠杆菌E.coli DH5α、BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.2 目的片段与载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.3 连接产物的转化 | 第35页 |
| 2.2.4 阳性克隆质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3 MDAP-2 全长基因片段的PCR扩增与克隆 | 第36-37页 |
| 2.3.1 MDAP-2 基因全长ORF序列引物的设计与合成 | 第37页 |
| 2.3.2 MDAP-2 基因ORF的PCR扩增 | 第37页 |
| 2.3.3 MDAP-2 基因ORF的克隆 | 第37页 |
| 2.4 MDAP-2 基因的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-45页 |
| 3.1 MDAP-2 基因的 5‘RACE扩增及克隆结果 | 第38-40页 |
| 3.2 MDAP-2 基因的 3‘RACE扩增及克隆结果 | 第40-41页 |
| 3.3 MDAP-2 全长基因的PCR扩增及克隆结果 | 第41-42页 |
| 3.4 MDAP-2 基因的生物信息学分析结果 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 家蝇抗菌肽 | 第45-46页 |
| 4.2 家蝇抗菌肽基因的获得 | 第46页 |
| 4.3 生物信息学分析 | 第46-47页 |
| 5 小结 | 第47-48页 |
| 第二章 MDAP-2 的原核表达、纯化及抗菌活性研究 | 第48-64页 |
| 1 材料 | 第48-51页 |
| 1.1 菌株及质粒 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 溶液的配置 | 第49-50页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第50-51页 |
| 2 方法 | 第51-55页 |
| 2.1 重组表达质粒p ET32a-MDAP-2 的构建 | 第51-52页 |
| 2.1.1 重组质粒的酶切、回收和连接 | 第51-52页 |
| 2.1.2 重组表达质粒的鉴定 | 第52页 |
| 2.2 重组质粒p ET32a-MDAP-2 的原核表达及表达产物的分析 | 第52-53页 |
| 2.2.1 MDAP-2 原核重组菌的构建 | 第52页 |
| 2.2.2 MDAP-2 重组菌的诱导表达及表达产物的鉴定 | 第52-53页 |
| 2.3 MDAP-2 原核表达产物的纯化 | 第53-54页 |
| 2.3.1 融合蛋白的纯化 | 第53-54页 |
| 2.3.2 融合蛋白的浓缩 | 第54页 |
| 2.3.3 融合蛋白的酶切及纯化 | 第54页 |
| 2.4 MDAP-2 体外抗菌活性检测 | 第54-55页 |
| 2.4.1 牛津杯法测定目的蛋白的体外抗菌活性 | 第54-55页 |
| 2.4.2 最低抑菌浓度（MIC值）检测 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-61页 |
| 3.1 重组表达质粒p ET32a-MDAP-2 的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2 重组质粒p ET32a-MDAP-2 原核表达产物的SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| 3.3 重组质粒p ET32a-MDAP-2 原核表达产物的Western-blot鉴定结果 | 第57-58页 |
| 3.4 MDAP-2 原核表达产物Ni-NFA柱纯化结果 | 第58-59页 |
| 3.5 MDAP-2 融合蛋白的酶切及纯化结果 | 第59页 |
| 3.6 MDAP-2 体外抗菌活性检测结果 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 4.1 抗革兰氏阴性菌药物的研究现状 | 第61页 |
| 4.2 抗菌肽重组表达载体的选择 | 第61-62页 |
| 4.3 重组表达抗菌肽的纯化 | 第62页 |
| 4.4 家蝇抗菌肽的抗菌活性 | 第62-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 第三章 抗菌肽MDAP-2 的生物学活性研究 | 第64-72页 |
| 1 材料 | 第64-65页 |
| 1.1 试验材料 | 第64页 |
| 1.2 试验仪器 | 第64-65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 2.1 圆二光谱法检测MDAP-2 的二级结构 | 第65页 |
| 2.2 抗菌肽MDAP-2 的体外溶血活性检测 | 第65页 |
| 2.3 抗菌肽MDAP-2 在小鼠体内的急性毒性试验 | 第65-66页 |
| 2.3.1 预实验 | 第65-66页 |
| 2.3.2 抗菌肽MDAP-2 对小鼠的LD50检测 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-68页 |
| 3.1 圆二光谱法检测MDAP-2 的二级结构检测结果 | 第66-67页 |
| 3.2 抗菌肽MDAP-2 的体外溶血活性检测结果 | 第67页 |
| 3.3 抗菌肽MDAP-2 在小鼠体内的急性毒性试验结果 | 第67-68页 |
| 3.3.1 预实验结果 | 第67-68页 |
| 3.3.2 抗菌肽MDAP-2 对小鼠的LD50检测结果 | 第68页 |
| 4 分析与讨论 | 第68-70页 |
| 4.1 抗菌肽的二级结构 | 第68-69页 |
| 4.2 抗菌肽的溶血活性 | 第69-70页 |
| 4.3 抗菌肽的急性毒性 | 第70页 |
| 5 小结 | 第70-72页 |
| 第四章 抗菌肽MDAP-2 对G-菌抗菌机制研究 | 第72-85页 |
| 1 材料 | 第72-73页 |
| 1.1 试验材料 | 第72页 |
| 1.2 试验仪器 | 第72-73页 |
| 2 方法 | 第73-75页 |
| 2.1 MDAP-2 对鸡沙门菌生长曲线的影响研究 | 第73页 |
| 2.1.1 鸡沙门氏菌生长曲线的测定 | 第73页 |
| 2.1.2 MDAP-2 对鸡沙门菌生长曲线的影响研究 | 第73页 |
| 2.2 透射电镜观察抗菌肽MDAP-2 对细菌微观形态的影响 | 第73-74页 |
| 2.3 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜通透性的影响 | 第74页 |
| 2.4 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞质膜的去极化能力研究 | 第74-75页 |
| 2.5 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜完整性的影响研究 | 第75页 |
| 2.6 家蝇抗菌肽MDAP-2 与DNA结合能力检测 | 第75页 |
| 3 结果 | 第75-81页 |
| 3.1 抗菌肽MDAP-2 对鸡沙门菌生长曲线的影响 | 第75-76页 |
| 3.2 透射电镜观察抗菌肽MDAP-2 对细菌微观形态的影响 | 第76-78页 |
| 3.3 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜通透性的影响 | 第78-79页 |
| 3.4 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞质膜的去极化能力研究 | 第79页 |
| 3.5 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜完整性的影响研究 | 第79-80页 |
| 3.6 家蝇抗菌肽MDAP-2 与DNA结合能力检测结果 | 第80-81页 |
| 4 讨论 | 第81-83页 |
| 4.1 透射电镜观察抗菌肽对细菌微观形态的影响 | 第81页 |
| 4.2 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜通透性的影响 | 第81-82页 |
| 4.3 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞质膜的去极化能力 | 第82页 |
| 4.4 抗菌肽MDAP-2 对细菌细胞膜完整性的影响 | 第82-83页 |
| 4.5 抗菌肽 MDAP-2 与 DNA 的结合能力 | 第83页 |
| 5 小结 | 第83-85页 |
| 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
