| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献研究 | 第12-20页 |
| 1.1 HBV的流行病学 | 第12-15页 |
| 1.1.1 HBV的病原学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 HBV的生命周期 | 第13-14页 |
| 1.1.3 HBV与免疫耐受 | 第14-15页 |
| 1.1.4 HBV的药物治疗 | 第15页 |
| 1.2 RNA干扰 | 第15-18页 |
| 1.2.1 siRNA | 第16页 |
| 1.2.2 miRNA | 第16-18页 |
| 1.3 小结 | 第18-20页 |
| 第二章 MIR-155真核表达载体的构建、鉴定及表达 | 第20-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-32页 |
| 2.2.1 HepG2.2.15细胞基因组DNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 pmiR-155真核表达质粒的构建 | 第24-28页 |
| 2.2.3 pmiR-155真核表达质粒的鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.4 pmiR-155真核表达质粒的表达 | 第29-32页 |
| 2.2.5 统计分析 | 第32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-40页 |
| 2.3.1 pmiR-155真核表达载体的构建及鉴定 | 第32-35页 |
| 2.3.2 细胞内荧光检测 | 第35-36页 |
| 2.3.3 pmiR-155真核表达质粒的表达 | 第36-40页 |
| 2.4 讨论 | 第40-43页 |
| 2.4.1 人miR-155真核表达载体构建成功 | 第40-41页 |
| 2.4.2 重组载体pmiR-155提高细胞内miR-155表达量 | 第41-43页 |
| 第三章 MIR-155在HBV慢性感染中调节免疫应答作用 | 第43-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-45页 |
| 3.1.1 细胞系及质粒 | 第43页 |
| 3.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第43-44页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第44页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第44-45页 |
| 3.2 实验方法 | 第45-51页 |
| 3.2.1 预测人miR-155靶基因位点 | 第45页 |
| 3.2.2 RT-PCR检测各组SOCS-1 mRNA变化 | 第45-46页 |
| 3.2.3 Western blot检测各组SOCS-1蛋白变化 | 第46-49页 |
| 3.2.4 ELISA检测各组细胞IFN-γ分泌量变化 | 第49-50页 |
| 3.2.5 ELISA检测各组细胞IL-2分泌量变化 | 第50-51页 |
| 3.2.6 统计分析 | 第51页 |
| 3.3 实验结果 | 第51-58页 |
| 3.3.1 SOCS-1是miR-155的靶位点 | 第51-52页 |
| 3.3.2 miR-155抑制SOCS-1 mRNA表达 | 第52-54页 |
| 3.3.3 miR-155抑制SOCS-1蛋白表达 | 第54-55页 |
| 3.3.4 miR-155促进IFN-γ和IL-2分泌 | 第55-56页 |
| 3.3.5 miR-155与SOCS-1 mRNA和细胞因子的相关性分析 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-61页 |
| 3.4.1 miRNA的免疫调节作用及其对HepG2.2.15细胞中IFN-γ、IL-2的影响 | 第58-59页 |
| 3.4.2 miR-155干预SOCS-1对IFN-γ、IL-2的负反馈调节作用 | 第59-61页 |
| 第四章 MIR-155对HBV复制及表达的影响 | 第61-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 细胞系及质粒 | 第61页 |
| 4.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第61页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第61-62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 4.2.1 人miR-155序列RT-qPCR扩增 | 第62页 |
| 4.2.2 乙型肝炎病毒表面抗原定量检测 | 第62页 |
| 4.2.3 乙型肝炎病毒e抗原定量检测 | 第62-63页 |
| 4.2.4 乙型肝炎病毒核酸定量检测 | 第63-64页 |
| 4.2.5 统计分析 | 第64页 |
| 4.3 实验结果 | 第64-68页 |
| 4.3.1 miR-155对HBsAg和HBeAg的抑制作用 | 第64-66页 |
| 4.3.2 miR-155对HBV DNA的抑制作用 | 第66-67页 |
| 4.3.3 miR-155和HBV蛋白和HBV DNA的相关性分析 | 第67-68页 |
| 4.4 讨论 | 第68-70页 |
| 4.4.1 HepG2.2.15细胞与HBV | 第69页 |
| 4.4.2 miR-155抑制HBV的可能机制 | 第69-70页 |
| 结语 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录 | 第77-83页 |
| 在校期间发表论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
