| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 引言 | 第11-34页 |
| 1. 三型分泌系统的基本概况 | 第11-25页 |
| 2. T3SS ATPase的研究进展 | 第25-33页 |
| 3. 小结 | 第33-34页 |
| 本课题拟解决的科学问题 | 第34-35页 |
| 本课题的研究内容和意义 | 第35-36页 |
| 1. T3SS的ATPase蛋白结构生物学研究 | 第35页 |
| 2. T3SS的ATPase蛋白的生物物理及生物化学的研究 | 第35-36页 |
| 1. 材料 | 第36-40页 |
| 1.1 菌株 | 第36页 |
| 1.2 ATP及其底物类似物 | 第36页 |
| 1.3 质粒 | 第36-37页 |
| 1.4 常用试剂和耗材 | 第37-38页 |
| 1.5 常用溶液 | 第38-39页 |
| 1.6 常用仪器和设备 | 第39-40页 |
| 2. 方法 | 第40-56页 |
| 2.1 质粒构建 | 第40-43页 |
| 2.2 蛋白表达与纯化 | 第43-47页 |
| 2.3 蛋白最适溶液的确定 | 第47-49页 |
| 2.4 Spa47/Invc△1-83酶活性测定 | 第49-50页 |
| 2.5 Spa47/Invc△1-83与ATP及其类似物的结合试验 | 第50-51页 |
| 2.6 晶体的初筛 | 第51-52页 |
| 2.7 晶体优化 | 第52页 |
| 2.8 ATPase与ATP底物类似物共结晶实验 | 第52-53页 |
| 2.9 晶体浸泡底物 | 第53-54页 |
| 2.10 晶体数据收集与结构解析 | 第54-56页 |
| 3. 结果 | 第56-85页 |
| 3.1 三型分泌系统ATPase同源比对分析 | 第56-58页 |
| 3.2 重组蛋白及其功能截短体蛋白表达与纯化 | 第58-59页 |
| 3.3 Spa47具有水解活性 | 第59-61页 |
| 3.4 Spa47单体选择性结合ATP类似物 | 第61-63页 |
| 3.5 Spa47蛋白在溶液中的构象 | 第63-65页 |
| 3.6 Spa47蛋白晶体学研究 | 第65-70页 |
| 3.7 Spa47晶体整体结构 | 第70-72页 |
| 3.8 三型分泌系统ATPase的结构比较 | 第72-74页 |
| 3.9 Spa47△1-83与底物类似物共晶体结构揭示底物结合的特异性 | 第74-76页 |
| 3.10 Spa47△1-83与ATPγS复合物结构决定核苷酸的特异性识别 | 第76-78页 |
| 3.11 Invc与底物ATPγS晶体结构与Spa47与ATPγS晶体结构比较 | 第78-80页 |
| 3.12 核苷酸的结合引起构象变化 | 第80-82页 |
| 3.13 三型分泌系统ATPase功能性突变研究 | 第82-85页 |
| 4. 讨论 | 第85-91页 |
| 4.1 三型分泌系统ATPase与F/V型ATPase结构相关而功能与转位酶类似 | 第85-86页 |
| 4.2 三型分泌系统ATPase寡聚化 | 第86-87页 |
| 4.3 三型分泌系统ATPase以瞬时多聚体形式发挥活性 | 第87页 |
| 4.4 三型分泌系统ATPase的底物结合 | 第87-88页 |
| 4.5 三型分泌系统ATPase与ATPγS共晶体结构与小分子抑制剂的设计 | 第88页 |
| 4.6 三型分泌系统ATPase C端结构域结合伴侣蛋白特性 | 第88-89页 |
| 4.7 三型分泌系统ATPase N端结构域定位(胞质或膜) | 第89-90页 |
| 4.8 介导六聚体模型的其它重要氨基酸 | 第90页 |
| 4.9 三型分泌系统ATPase的构型 | 第90-91页 |
| 5. 结论 | 第91-92页 |
| 6. 展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-100页 |
| 附录 | 第100-108页 |
| 致谢 | 第108-110页 |
| 个人简历及发表文章 | 第110页 |
