| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 贝壳结构与形成 | 第13-14页 |
| 1.1.1 贝壳结构 | 第13页 |
| 1.1.2 贝壳形成 | 第13-14页 |
| 1.2 珍珠形成理论研究 | 第14-16页 |
| 1.2.1 珍珠的形成 | 第14页 |
| 1.2.2 珍珠形成相关理论 | 第14-16页 |
| 1.3 贝壳基质蛋白 | 第16-18页 |
| 1.3.1 棱柱层矿化基质蛋白 | 第17页 |
| 1.3.2 珍珠层矿化基质蛋白 | 第17-18页 |
| 1.3.3 矿化层共有基质蛋白 | 第18页 |
| 1.4 碳酸酐酶基因在贝类中研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 三角帆蚌HcCA3基因克隆和分析 | 第21-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验蚌 | 第21页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第21-22页 |
| 2.1.3 常用溶液和培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.3.1 总RNA提取所需溶液 | 第22页 |
| 2.1.3.2 琼脂糖凝胶电泳溶液 | 第22页 |
| 2.1.3.3 培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 外套膜组织总RNA提取 | 第24页 |
| 2.2.2 外套膜的cDNA合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 引物合成 | 第25-26页 |
| 2.2.4 HcCA3基因短片段扩增、测序 | 第26页 |
| 2.2.5 HcCA3基因RACE片段克隆、测序 | 第26-28页 |
| 2.2.5.1 3'-RACE的扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5.2 5' RACE片段的扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.6 HcCA3基因全长序列拼接和生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-36页 |
| 2.3.1 外套膜总RNA和RACE产物的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.2 HcCA3基因cDNA全长序列分析 | 第30页 |
| 2.3.3 HcCA3蛋白氨基酸序列分析 | 第30-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 三角帆蚌HcCA3基因的荧光定量分析 | 第37-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 实验蚌 | 第37-38页 |
| 3.1.2 试剂与耗材 | 第38页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第38页 |
| 3.2 实验方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 各组织总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2.2 三角帆蚌各组织cDNA链的合成 | 第38-39页 |
| 3.2.3 三角帆蚌HcCA3基因的荧光定量分析 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-44页 |
| 3.3.1 组织特异性表达分析 | 第40-41页 |
| 3.3.2 插核后各组织的表达 | 第41-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 三角帆蚌HcCA3基因的表达和功能探究 | 第46-64页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 4.1.1 实验蚌 | 第47页 |
| 4.1.2 试剂与耗材 | 第47页 |
| 4.1.3 实验设备 | 第47-48页 |
| 4.2 实验方法 | 第48-54页 |
| 4.2.1 三角帆蚌HcCA3基因的原位杂交 | 第48-49页 |
| 4.2.1.1 相关试剂 | 第48页 |
| 4.2.1.2 冰冻切片制备 | 第48页 |
| 4.2.1.3 探针信息 | 第48页 |
| 4.2.1.4 实验操作 | 第48-49页 |
| 4.2.2 HcCA3基因的原核表达和抗体Western Blot检测 | 第49-52页 |
| 4.2.2.1 重组蛋白的构建 | 第49-50页 |
| 4.2.2.2 重组蛋白的诱导表达、纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.2.3 Western blot检测重组蛋白 | 第51页 |
| 4.2.2.4 组织总蛋白电泳和抗体检测 | 第51-52页 |
| 4.2.3 三角帆蚌HcCA3基因的RNA干扰 | 第52-54页 |
| 4.2.3.1 siRNA的制备 | 第52-53页 |
| 4.2.3.2 HcCA3基因干扰链的筛选 | 第53页 |
| 4.2.3.3 阴性对照链筛选实验 | 第53页 |
| 4.2.3.4 RNA干扰正式实验设置 | 第53页 |
| 4.2.3.5 RNA提取、cDNA第一链的合成 | 第53-54页 |
| 4.2.3.6 荧光定量检测 | 第54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-62页 |
| 4.3.1 原位杂交 | 第54-55页 |
| 4.3.2 原核表达结果 | 第55-57页 |
| 4.3.3 抗体Western blot检测 | 第57-59页 |
| 4.3.4 RNA干扰 | 第59-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 附录 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
