| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-39页 |
| 第一章 β-乳球蛋白研究进展 | 第15-20页 |
| 1.1 β-乳球蛋白结构 | 第15-16页 |
| 1.2 β-乳球蛋白的生物功能 | 第16-17页 |
| 1.3 β-乳球蛋白致敏性研究及其解决方法 | 第17-20页 |
| 1.3.1 β-乳球蛋白的致敏性 | 第17-18页 |
| 1.3.2 β-乳球蛋白的致敏性的降低与消除 | 第18-20页 |
| 第二章 人工核酸酶在家畜靶向基因组编辑研究中的应用 | 第20-39页 |
| 2.1 DNA双链断裂修复机制 | 第20-25页 |
| 2.1.1 非同源末端连接修复途径 | 第20-21页 |
| 2.1.2 同源重组修复途径 | 第21-24页 |
| 2.1.3 修复途径的选择调控 | 第24页 |
| 2.1.4 双链断裂修复时NHEJ和HR的合作 | 第24-25页 |
| 2.2 人工核酸内切酶 | 第25-33页 |
| 2.2.1 锌指核酸酶 | 第25-27页 |
| 2.2.2 类转录激活因子效应物核酸酶 | 第27-31页 |
| 2.2.3 CRISPR/Cas9 | 第31-33页 |
| 2.3 人工核酸酶介导的NHEJ修复在家畜靶向基因组编辑中的应用 | 第33-38页 |
| 2.4 人工核酸酶介导的HR修复在家畜靶向基因组编辑中的应用 | 第38-39页 |
| 试验研究 | 第39-93页 |
| 第三章 靶向山羊BLG基因的TALENs表达载体的构建 | 第39-50页 |
| 3.1 试验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和细胞株 | 第39页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.3 测试化验加工 | 第40页 |
| 3.2 试验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 单元组装法构建TALENs表达载体 | 第40-41页 |
| 3.2.2 TALENs的生物活性验证 | 第41-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 以山羊BLG基因为靶位点的TALENs表达载体的构建 | 第42-46页 |
| 3.3.2 双荧光报告系统验证TALENs的生物活性 | 第46-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-50页 |
| 第四章 山羊BLG基因打靶载体的构建 | 第50-59页 |
| 4.1 试验材料 | 第50-51页 |
| 4.1.1 血液样本 | 第50页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第50页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.4 测试化验加工 | 第51页 |
| 4.2 试验方法 | 第51-53页 |
| 4.2.1 山羊BLG基因打靶载体pBLG-neo-M的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.2 山羊BLG基因打靶载体pBLG-neo的构建 | 第52-53页 |
| 4.2.3 山羊BLG基因打靶载体pBLG-puro的构建 | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-57页 |
| 4.3.1 基因打靶载体pBLG-neo和pBLG-neo-M的构建 | 第53-55页 |
| 4.3.2 基因打靶载体pBLG-puro的构建 | 第55-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-58页 |
| 4.5 小结 | 第58-59页 |
| 第五章 山羊体细胞中TALEN介导的基因打靶效率检测 | 第59-73页 |
| 5.1 试验材料 | 第59-60页 |
| 5.1.1 动物组织 | 第59页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第59-60页 |
| 5.1.3 测试化验加工 | 第60页 |
| 5.2 试验方法 | 第60-65页 |
| 5.2.1 西农莎能奶山羊胎儿成纤维细胞的培养与性别鉴定 | 第60-61页 |
| 5.2.2 山羊胎儿成纤维细胞中TALEN介导的NHEJ引起的BLG基因修饰 | 第61-62页 |
| 5.2.3 山羊胎儿成纤维细胞中TALEN介导的山羊BLG基因打靶效率 | 第62-65页 |
| 5.3 结果 | 第65-69页 |
| 5.3.1 山羊胎儿成纤维细胞的培养与性别鉴定 | 第65页 |
| 5.3.2 山羊胎儿成纤维细胞中山TALEN介导的NHEJ引起的BLG基因修饰检测 | 第65-66页 |
| 5.3.3 山羊胎儿成纤维细胞中TALENs介导的BLG基因打靶效率检测 | 第66-69页 |
| 5.4 讨论 | 第69-71页 |
| 5.5 小结 | 第71-73页 |
| 第六章 体细胞核移植生产BLG基因单敲除奶山羊 | 第73-82页 |
| 6.1 试验材料 | 第73-74页 |
| 6.1.1 实验动物 | 第73页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第73-74页 |
| 6.1.3 测试化验加工 | 第74页 |
| 6.2 试验方法 | 第74-76页 |
| 6.2.1 体细胞核移植及胚胎移植 | 第74-75页 |
| 6.2.2 转基因山羊PCR和Southern鉴定 | 第75-76页 |
| 6.3 结果 | 第76-79页 |
| 6.3.1 基因打靶细胞的体细胞核移植及效率检测 | 第76-78页 |
| 6.3.2 转基因山羊PCR和Southern鉴定 | 第78-79页 |
| 6.4 讨论 | 第79-81页 |
| 6.5 小结 | 第81-82页 |
| 第七章BLG基因双敲除奶山羊的生产 | 第82-93页 |
| 7.1 试验材料 | 第82-83页 |
| 7.1.1 实验动物 | 第82页 |
| 7.1.2 质粒和菌株 | 第82页 |
| 7.1.3 主要试剂 | 第82-83页 |
| 7.1.4 测试化验加工 | 第83页 |
| 7.2 试验方法 | 第83-85页 |
| 7.2.1 BLG基因单敲除成体成纤维细胞的培养 | 第83页 |
| 7.2.2 二次基因打靶效率的检测 | 第83-84页 |
| 7.2.3 BLG基因双敲除山羊的生产及鉴定 | 第84-85页 |
| 7.3 结果 | 第85-90页 |
| 7.3.1 BLG基因单敲除成体成纤维细胞的培养 | 第85页 |
| 7.3.2 二次基因打靶效率的检测 | 第85-88页 |
| 7.3.3 BLG基因双敲除山羊的生产 | 第88-90页 |
| 7.4 讨论 | 第90-92页 |
| 7.5 小结 | 第92-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 创新之处与进一步研究的课题 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-112页 |
| 附录 主要仪器 | 第112-114页 |
| 缩略词 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 作者简介 | 第116页 |
