| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章（文献综述 ） 病毒进入宿主细胞途径的研究进展 | 第12-21页 |
| 1.1 膜融合内化进入细胞 | 第12-13页 |
| 1.2 内吞途径内化进入细胞 | 第13-18页 |
| 1.2.1 内吞作用概述 | 第13页 |
| 1.2.2 内吞作用的分类 | 第13-18页 |
| 1.3 腺病毒进入宿主细胞途径 | 第18-20页 |
| 1.3.1 人腺病毒进入宿主细胞途径 | 第18页 |
| 1.3.2 减蛋综合症病毒进入宿主细胞途径 | 第18-20页 |
| 1.4 本课题研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 实时荧光定量PCR检测EDSV方法的建立 | 第21-32页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 病毒株，菌株和载体 | 第21页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 常用试剂及培养基的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 病毒增殖 | 第22页 |
| 2.2.2 荧光定量用引物设计 | 第22页 |
| 2.2.3 病毒DNA提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 EDSV实时荧光定量PCR重组质粒的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR方法的建立 | 第25-26页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR方法的评价 | 第26页 |
| 2.3 结果 | 第26-30页 |
| 2.3.1 常规PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2 重组质粒的菌液PCR和酶切鉴定结果 | 第27页 |
| 2.3.3 基因序列测定分析 | 第27页 |
| 2.3.4 标准品质粒的拷贝数计算 | 第27-28页 |
| 2.3.5 扩增曲线的建立 | 第28页 |
| 2.3.6 标准曲线的建立 | 第28-29页 |
| 2.3.7 溶解曲线分析 | 第29页 |
| 2.3.8 敏感性分析 | 第29-30页 |
| 2.3.9 重复性验证 | 第30页 |
| 2.3.10 特异性验证 | 第30页 |
| 2.4 讨论 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 EDSV在DEF和CEL细胞上的增殖规律研究及间接免疫荧光对病毒的检测 | 第32-42页 |
| 3.1 材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1 试验动物 | 第32页 |
| 3.1.2 病毒和细胞 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第32页 |
| 3.1.5 常用试剂及培养基的配制 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 原代鸭胚成纤维细胞的制备 | 第33-34页 |
| 3.2.2 原代鸡胚肝细胞的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.3 EDSV TCID50的检测 | 第35页 |
| 3.2.4 EDSV病毒感染DEF，CEL，DF1和LMH细胞的病变观察 | 第35页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR检测EDSV病毒在DEF，CEL，DF1和LMH细胞上的增殖情况 | 第35页 |
| 3.2.6 间接免疫荧光检测EDSV | 第35-37页 |
| 3.3 结果 | 第37-40页 |
| 3.3.1 原代鸭胚成纤维细胞感染EDSV后的细胞病变 | 第37页 |
| 3.3.2 原代鸡胚肝细胞感染EDSV后的细胞病变 | 第37-38页 |
| 3.3.3 EDSV病毒TCID50的检测 | 第38-39页 |
| 3.3.4 EDSV病毒在DEF、CEL细胞上的增殖规律 | 第39页 |
| 3.3.5 超速离心纯化的EDSV | 第39-40页 |
| 3.3.6 HI试验检测鼠抗EDSV高免血清的抗体水平 | 第40页 |
| 3.3.7 间接免疫荧光鉴定EDSV | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 结论 | 第41-42页 |
| 第四章 EDSV经内吞作用进入细胞的研究 | 第42-50页 |
| 4.1 材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 细胞、病毒与抗体 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第42页 |
| 4.1.4 常用试剂及培养基的配制 | 第42-43页 |
| 4.2 方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 透射电镜观察EDSV感染DEF细胞的过程 | 第43-44页 |
| 4.2.2 实时荧光定量PCR检测不同浓度内吞抑制剂对病毒进入的影响 | 第44页 |
| 4.2.3 间接免疫荧光观察CPZ和sucrose对EDSV进入的影响 | 第44-45页 |
| 4.2.4 数据统计分析 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-47页 |
| 4.3.1 EDSV经内吞作用进入DEF细胞 | 第45-46页 |
| 4.3.2 CPZ、MβCD、NH4Cl、Sucrose处理后的对病毒含量变化影响 | 第46-47页 |
| 4.3.3 间接免疫荧光观察EDSV感染用CPZ和sucrose处理后的DEF细胞 | 第47页 |
| 4.4 讨论 | 第47-48页 |
| 4.5 小结 | 第48-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 缩略词表 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简介 | 第58页 |
