| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 链霉菌自抗性机制的研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2 抗肿瘤抗生素azinomycin B的研究进展 | 第12-19页 |
| 1.2.1 azinomycin B的作用机制 | 第13-15页 |
| 1.2.2 azinomycin B生物合成的研究 | 第15-19页 |
| 1.2.3 azinomycin B抗性机制的研究 | 第19页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第19-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-31页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 质粒 | 第22页 |
| 2.1.3 引物 | 第22-26页 |
| 2.1.4 培养基 | 第26-27页 |
| 2.1.5 生化试剂 | 第27-30页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-39页 |
| 2.2.1 链霉菌的培养及菌种保藏 | 第31页 |
| 2.2.2 链霉菌总DNA的提取——醋酸钾法 | 第31-32页 |
| 2.2.3 聚合酶链式反应(PCR) | 第32页 |
| 2.2.4 DNA片段凝胶回收(Axygen DNA凝胶回收试剂盒) | 第32-33页 |
| 2.2.5 连接反应 | 第33页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.7 DNA转化 | 第33-34页 |
| 2.2.8 大肠杆菌质粒的小量提取 | 第34页 |
| 2.2.9 大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移 | 第34页 |
| 2.2.10 S.sahachiroi菌株固体发酵及发酵产物的HPLC检测 | 第34-35页 |
| 2.2.11 发酵产物的生物活性分析 | 第35页 |
| 2.2.12 目的蛋白的表达与纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.13 电泳迁移实验(EMSA) | 第36页 |
| 2.2.14 链霉菌RNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.15 cDNA的合成(Roche Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit) | 第37页 |
| 2.2.16 SYBR GreenI实时定量PCR(Roche FastStart Universal SYBR Green Master (ROX)) | 第37-39页 |
| 第三章 结果与分析 | 第39-66页 |
| 3.1 orf1-orf6基因同框缺失质粒的构建及检测 | 第39-43页 |
| 3.2 同框缺失突变菌株的筛选和验证 | 第43-45页 |
| 3.3 同框缺失菌株的生物活性检测及HPLC分析 | 第45-47页 |
| 3.4 回补突变菌株的构建 | 第47-52页 |
| 3.5 基因orf1和orf3的异源表达 | 第52-55页 |
| 3.6 基因orf1和orf3在S.sahachiroi的加倍表达 | 第55-56页 |
| 3.7 Orf1和Orf3蛋白的表达和纯化 | 第56-60页 |
| 3.8 Orf1蛋白与DNA的相互作用 | 第60-62页 |
| 3.9 产生菌中orf1基因表达水平的分析 | 第62-66页 |
| 第四章 讨论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
