| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-15页 |
| 1.1 培哚普利简介及合成方法 | 第8-9页 |
| 1.1.1 培哚普利简介 | 第8页 |
| 1.1.2 培哚普利的合成方法 | 第8-9页 |
| 1.2 关键中间体L-正缬氨酸的合成方法 | 第9-12页 |
| 1.2.1 化学法合成L-正缬氨酸 | 第10页 |
| 1.2.2 生物法合成L-正缬氨酸 | 第10-12页 |
| 1.3 D-氨基酸氧化酶，亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶简介 | 第12-13页 |
| 1.3.1 D-氨基酸氧化酶 | 第12页 |
| 1.3.2 亮氨酸脱氢酶 | 第12页 |
| 1.3.3 甲酸脱氢酶 | 第12-13页 |
| 1.4 本课题研究内容 | 第13-15页 |
| 1.4.1 本课题立题背景及研究意义 | 第13-14页 |
| 1.4.2 本课题主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15-16页 |
| 2.1.2 引物 | 第16页 |
| 2.1.3 培养基与培养条件 | 第16-17页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.5 主要实验试剂 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 基因组提取 | 第18页 |
| 2.2.2 目的基因的克隆 | 第18页 |
| 2.2.3 重组质粒和重组菌构建及培养方法 | 第18-20页 |
| 2.2.4 关键酶酶活测定 | 第20-21页 |
| 2.2.5 关键酶的纯化及酶学性质分析 | 第21页 |
| 2.2.6 酶促拆分结合不对称还原转化体系的构建及条件优化 | 第21-22页 |
| 2.2.7 分批补料策略生产L-正缬氨酸 | 第22页 |
| 2.2.8 底物和产物浓度测定方法 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-46页 |
| 3.1 关键酶表达体系的选择优化 | 第24-31页 |
| 3.1.1 D-氨基酸氧化酶基因daao的克隆及表达体系优化 | 第24-26页 |
| 3.1.2 亮氨酸脱氢酶基因leudh的克隆及表达体系优化 | 第26-28页 |
| 3.1.3 甲酸脱氢酶基因fdh的克隆及表达体系优化 | 第28-31页 |
| 3.2 关键酶酶学性质分析 | 第31-37页 |
| 3.2.1 DAAO，LeuDH和FDH的纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.2 DAAO，LeuDH和FDH的最适温度和最适pH | 第32-34页 |
| 3.2.3 DAAO，LeuDH和FDH的温度稳定性和pH稳定性 | 第34-35页 |
| 3.2.4 金属离子对DAAO，LeuDH和FDH酶活的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.5 DAAO，LeuDH和FDH的K_m值和V_(max)值测定 | 第36-37页 |
| 3.2.6 DAAO，LeuDH和FDH酶学性质比较 | 第37页 |
| 3.3 多酶介导拆分结合不对称还原转化体系的构建及条件优化 | 第37-42页 |
| 3.3.1 多酶介导拆分结合不对称还原转化体系的构建 | 第37-38页 |
| 3.3.2 转化体系的最适pH和最适温度优化 | 第38页 |
| 3.3.3 过氧化氢酶添加量优化 | 第38-39页 |
| 3.3.4 DAAO，LeuDH和FDH的酶量配比优化 | 第39-41页 |
| 3.3.5 最优条件下摇瓶转化合成L-正缬氨酸 | 第41-42页 |
| 3.4 5 L罐分批补料策略生产L-正缬氨酸 | 第42-46页 |
| 3.4.1 单批次底物添加量优化 | 第42页 |
| 3.4.2 中间物 2-戊酮酸对DAAO和LeuDH的抑制性分析 | 第42-43页 |
| 3.4.3 5 L罐分批补料催化合成L-正缬氨酸 | 第43-45页 |
| 3.4.4 多酶介导拆分结合不对称还原转化体系的应用拓展 | 第45-46页 |
| 主要结论与展望 | 第46-48页 |
| 主要结论 | 第46页 |
| 展望 | 第46-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |
