| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 抗菌肽类 | 第12-15页 |
| 1.1.1 抗菌肽及其性质 | 第12页 |
| 1.1.2 抗菌肽的分类 | 第12页 |
| 1.1.3 抗菌肽活性及其影响因素 | 第12-13页 |
| 1.1.4 抗菌肽类的研究与应用 | 第13-15页 |
| 1.2 抗菌酶类 | 第15-18页 |
| 1.2.1 抗菌酶及其性质 | 第15页 |
| 1.2.2 抗菌酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.3 抗菌酶活性及影响因素 | 第16页 |
| 1.2.4 抗菌酶类的研究与应用 | 第16-18页 |
| 1.3 抗菌肽和抗菌酶的研究进展 | 第18-22页 |
| 1.3.1 抗菌肽AP的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.2 抗菌肽AB的研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3.3 抗菌肽Plectasin的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.4 抗菌肽PSI的研究进展 | 第21页 |
| 1.3.5 抗菌酶葡萄糖氧化酶（GOX）的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 研究方法 | 第24-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 酶及生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基 | 第25-26页 |
| 2.2 抗菌肽和抗菌酶基因的合成 | 第26-28页 |
| 2.2.1 抗菌肽AP的基因序列设计与合成 | 第26页 |
| 2.2.2 抗菌肽AB的基因序列设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.2.3 抗菌肽Plectasin基因序列的设计与合成 | 第27页 |
| 2.2.4 抗菌肽PSI基因序列的设计与合成 | 第27页 |
| 2.2.5 葡萄糖氧化酶基因（GOX）的设计与合成 | 第27-28页 |
| 2.2.6 颤藻血红蛋白（VHb）的基因vgb的设计与合成 | 第28页 |
| 2.3 重组质粒的构建和菌株的转化 | 第28-57页 |
| 2.3.1 毕赤酵母质粒的构建和菌株的转化 | 第28-36页 |
| 2.3.2 乳酸克鲁维酵母中PSI和GOX基因的重组质粒构建和菌株的转化 | 第36-45页 |
| 2.3.3 毕赤酵母阳性转化子的诱导培养 | 第45页 |
| 2.3.4 乳酸克鲁维酵母阳性转化子的诱导培养 | 第45-46页 |
| 2.3.5 抗菌肽AP、AB和Plectasin诱导表达及上清液抑菌活性的检测 | 第46页 |
| 2.3.6 抗菌肽PSI的诱导表达及上清液抑菌活性的检测 | 第46页 |
| 2.3.7 抗菌肽生物效价检测 | 第46-47页 |
| 2.3.8 抗菌肽的质谱检测 | 第47-48页 |
| 2.3.9 抗菌肽的SDS-PAGE检测 | 第48-49页 |
| 2.3.10 抗菌肽PSI的纯化及抑菌活性鉴定 | 第49-51页 |
| 2.3.11 重组菌株的NTG诱变 | 第51-53页 |
| 2.3.12 影响抗菌肽AP、AB、Plectasin抑菌效果因素的研究 | 第53-54页 |
| 2.3.13 抗菌肽PSI诱导表达条件的优化 | 第54页 |
| 2.3.14 抗菌肽PSI的耐热性和抗菌谱的研究 | 第54页 |
| 2.3.15 葡萄糖氧化酶酶活的测定 | 第54-55页 |
| 2.3.16 影响发酵上清液中的葡萄糖氧化酶酶活的因素分析 | 第55-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-90页 |
| 3.1 抗菌肽AP的重组表达及分析 | 第57-64页 |
| 3.1.1 重组表达质粒pPICAP的构建 | 第57页 |
| 3.1.2 菌株的转化与表达 | 第57-58页 |
| 3.1.3 重组表达菌株的生长分析 | 第58-60页 |
| 3.1.4 NTG诱变筛选重组表达稳定及高产菌株 | 第60页 |
| 3.1.5 抗菌肽AP的质谱检测 | 第60-61页 |
| 3.1.6 抗菌肽AP重组菌株APmu4发酵条件的优化 | 第61-64页 |
| 3.2 抗菌肽AB重组表达的研究 | 第64-71页 |
| 3.2.1 重组表达质粒pPICAB的构建 | 第64-65页 |
| 3.2.2 重组质粒的转化与表达 | 第65页 |
| 3.2.3 重组菌株AB5的NTG诱变 | 第65页 |
| 3.2.4 重组质粒pGAPV的构建及菌株转化与筛选 | 第65-67页 |
| 3.2.5 ABN97vgb菌株产抗菌肽AB的质谱检测 | 第67-68页 |
| 3.2.6 菌株ABN97vgb发酵条件的优化 | 第68-71页 |
| 3.3 抗菌肽Plectasin的重组表达的研究 | 第71-75页 |
| 3.3.1 重组表达质粒的构建 | 第71-72页 |
| 3.3.2 重组质粒pPICPle的酵母菌转化与表达 | 第72页 |
| 3.3.3 NTG诱变筛选高产抗菌肽Plectasin重组菌株 | 第72-73页 |
| 3.3.4 重组产Plectasin菌株Ple100发酵条件的优化 | 第73-75页 |
| 3.4 抗霉菌类抗菌物质重组表达的研究 | 第75-83页 |
| 3.4.1 PCR扩增抗菌肽PSI基因 | 第75-76页 |
| 3.4.2 重组PSI基因整合型质粒pKLACPSI的构建 | 第76-77页 |
| 3.4.3 重组PSI基因的游离型质粒pKLDUPSI的构建 | 第77页 |
| 3.4.4 抗菌肽PSI重组菌株的转化与筛选 | 第77-78页 |
| 3.4.5 NTG诱变筛选高产抗菌肽PSI的菌株 | 第78-79页 |
| 3.4.6 SDS-PAGE分析重组菌产抗菌肽PSI | 第79页 |
| 3.4.7 重组菌株PN21产抗菌肽PSI的纯化与检测 | 第79-80页 |
| 3.4.8 重组菌株PN21产抗菌肽PSI发酵条件的优化 | 第80-81页 |
| 3.4.9 重组菌株PN21产抗菌肽PSI对果蔬保鲜的效果 | 第81-82页 |
| 3.4.10 重组菌株PN21产抗菌肽PSI耐热性 | 第82页 |
| 3.4.11 重组菌株PN21产抗菌肽PSI的抗菌谱 | 第82-83页 |
| 3.5 葡萄糖氧化酶GOX的重组表达及酶性质研究 | 第83-90页 |
| 3.5.1 葡萄糖氧化酶（GOX）基因表达片段的PCR扩增 | 第83-84页 |
| 3.5.2 GOX重组整合型质粒pKLACGOX的构建 | 第84-85页 |
| 3.5.3 GOX重组游离型质粒pKDUGOX的构建 | 第85-86页 |
| 3.5.4 化学法筛选转化的乳酸克鲁维酵母阳性菌株 | 第86页 |
| 3.5.5 GOX表达活性检测与表达量分析 | 第86-88页 |
| 3.5.6 pH、温度和盐浓度对GOX酶活的影响 | 第88-90页 |
| 4 讨论与结论 | 第90-93页 |
| 4.1 讨论 | 第90-91页 |
| 4.2 结论 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 参考文献 | 第95-104页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第104页 |
