| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩略表 | 第17-18页 |
| 第一章 绪论 | 第18-32页 |
| 1.1 人类内源性逆转录病毒 | 第18-19页 |
| 1.2 HERVS分类 | 第19-20页 |
| 1.3 HERV的结构与分布 | 第20-21页 |
| 1.4 HERV的生物学功能 | 第21-22页 |
| 1.4.1 编码基因的表达 | 第21页 |
| 1.4.2 对其他基因的顺势调控作用 | 第21-22页 |
| 1.4.3 HERV元件的相互作用 | 第22页 |
| 1.4.4 其他作用 | 第22页 |
| 1.5 HERV与肿瘤 | 第22-24页 |
| 1.6 HERV-W家族 | 第24-27页 |
| 1.6.1 HERV-W | 第24页 |
| 1.6.2 Syncytin与白血病 | 第24-27页 |
| 1.7 小鼠白血病模型 | 第27-28页 |
| 1.7.1 近交系小鼠 | 第28页 |
| 1.7.2 突变系小鼠 | 第28页 |
| 1.8 研究内容 | 第28-32页 |
| 1.8.1 稳定表达syncytin EL4细胞系的构建 | 第29-30页 |
| 1.8.2 Syncytin基因异常表达小鼠动物模型的建立 | 第30-32页 |
| 第二章 稳定表达syncytin EL4细胞系的构建 | 第32-70页 |
| 2.1 实验试剂溶液、耗材、仪器 | 第32-36页 |
| 2.1.1 试剂溶液 | 第32-35页 |
| 2.1.2 耗材 | 第35页 |
| 2.1.3 仪器 | 第35-36页 |
| 2.2 Syncytin过表达载体构建 | 第36-43页 |
| 2.2.1 载体的构建 | 第36-40页 |
| 2.2.2 STBL3菌种扩增培养 | 第40页 |
| 2.2.3 STBL3感受态细胞制作 | 第40-41页 |
| 2.2.4 载体转化 | 第41页 |
| 2.2.5 转化扩增培养后单克隆挑取及扩大培养 | 第41页 |
| 2.2.6 hLUC慢病毒载体提取 | 第41-42页 |
| 2.2.7 质粒浓度测定及琼脂糖凝胶电泳 | 第42-43页 |
| 2.2.7.1 质粒浓度测定 | 第42页 |
| 2.2.7.2 电泳检测 | 第42-43页 |
| 2.2.8 结果 | 第43页 |
| 2.2.8.1 浓度测定 | 第43页 |
| 2.2.8.2 凝胶电泳图 | 第43页 |
| 2.3 载体转化、扩增、提取 | 第43-44页 |
| 2.4 载体测序 | 第44-47页 |
| 2.5 质粒转染EL4细胞 | 第47-49页 |
| 2.5.1 EL4细胞培养 | 第47-48页 |
| 2.5.2 转染 | 第48-49页 |
| 2.6 Western Blot检测质粒的有效性 | 第49-55页 |
| 2.6.1 抗体和溶液的配置 | 第49-50页 |
| 2.6.2 细胞总蛋白的提取与变性 | 第50页 |
| 2.6.3 用BCA蛋白定量试剂盒测定样品中蛋白含量 | 第50-52页 |
| 2.6.4 制胶 | 第52-53页 |
| 2.6.5 蛋白变性 | 第53页 |
| 2.6.6 电泳 | 第53页 |
| 2.6.7 转膜 | 第53页 |
| 2.6.8 封闭和孵育抗体 | 第53-54页 |
| 2.6.9 显影 | 第54页 |
| 2.6.10 实验结果及分析 | 第54-55页 |
| 2.7 慢病毒包装质粒转染EL4后的RT-PCR检测 | 第55-58页 |
| 2.7.1 Trizol法提取细胞总RNA | 第55页 |
| 2.7.2 RNA逆转录及总RNA浓度测定 | 第55-56页 |
| 2.7.3 RT-PCR检测 | 第56-57页 |
| 2.7.4 RT-PCR结果 | 第57-58页 |
| 2.8 筛选Syncytin-EL4稳定表达细胞株 | 第58-60页 |
| 2.8.1 慢病毒包装 | 第58-59页 |
| 2.8.2 Syncytin慢病毒感染EL4细胞 | 第59页 |
| 2.8.3 筛选Syncytin-EL4稳定表达细胞株的筛选 | 第59-60页 |
| 2.9 WB和QPCR检测syncytin-EL4稳定表达细胞 | 第60-69页 |
| 2.9.1 WB检测稳定表达细胞表达蛋白表达 | 第60-64页 |
| 2.9.1.1 细胞总蛋白的提取与变性(所有的操作均要在冰上进行) | 第61页 |
| 2.9.1.2 用BCA蛋白定量试剂盒测定样品中蛋白含量 | 第61-62页 |
| 2.9.1.3 电泳、转膜、孵育抗体及显影 | 第62-64页 |
| 2.9.1.4 实验结果及分析 | 第64页 |
| 2.9.2 PCR检测稳定表达细胞mRNA表达 | 第64-69页 |
| 2.9.2.1 实验中主要试剂的配制 | 第64-65页 |
| 2.9.2.2 引物 | 第65页 |
| 2.9.2.3 标本的处理 | 第65页 |
| 2.9.2.4 总RNA的提取 | 第65-66页 |
| 2.9.2.5 RNA质量检测 | 第66页 |
| 2.9.2.6 逆转录合成cDNA | 第66-67页 |
| 2.9.2.7 定量PCR检测 | 第67-69页 |
| 2.10 本章实验小结 | 第69-70页 |
| 第三章 Syncytin基因异常表达小鼠白血病动物模型的建立 | 第70-80页 |
| 3.1 实验试剂、耗材、仪器 | 第71-72页 |
| 3.2 Syncytin基因异常表达小鼠动物模型的建立 | 第72-78页 |
| 3.2.1 小鼠骨髓移植前处理 | 第72页 |
| 3.2.2 小鼠骨髓移植(BMT)分组 | 第72页 |
| 3.2.3 BMT后的观察 | 第72-73页 |
| 3.2.4 实验结果与分析 | 第73-78页 |
| 本章小结 | 第78-80页 |
| 第四章 结论 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 附录A | 第88页 |
| 附录B | 第88页 |
