| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 引言 | 第11-15页 |
| 1 实验设计方案 | 第15-18页 |
| ·实验目的和意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·技术路线 | 第16页 |
| ·实验方案 | 第16-18页 |
| 2 实验材料与方法 | 第18-30页 |
| ·材料 | 第18-19页 |
| ·细胞 | 第18页 |
| ·耗材 | 第18页 |
| ·实验设备 | 第18-19页 |
| ·主要试剂及配制 | 第19-23页 |
| ·主要试剂 | 第19-20页 |
| ·PBS 溶液 | 第20页 |
| ·D-Hanks 溶液 | 第20页 |
| ·RPM-1640 培养基 | 第20页 |
| ·0.25% 胰酶 | 第20-21页 |
| ·50×Tris-醋酸（TAE） | 第21页 |
| ·396琼脂糖凝胶 | 第21页 |
| ·蛋白裂解液 | 第21页 |
| ·苯甲基磺酰氟（PMSF, 10mmol/L） | 第21页 |
| ·10% SDS | 第21页 |
| ·5×SDS 上样缓冲液 | 第21页 |
| ·1.0 mol/L Tris.HCL (pH=6.8) | 第21页 |
| ·1.5 mol/L Tris.HCL (pH=8.8) | 第21-22页 |
| ·10% AP | 第22页 |
| ·30% Acr : Bis 混合液 | 第22页 |
| ·5%浓缩胶（3 ml） | 第22页 |
| ·12%分离胶（5 ml） | 第22页 |
| ·蛋白电泳缓冲液 | 第22页 |
| ·蛋白转膜缓冲液 | 第22-23页 |
| ·TBS 缓冲液 | 第23页 |
| ·TBST 缓冲液 | 第23页 |
| ·封闭液（3% BSA） | 第23页 |
| ·5 mg/ml MTT 溶液 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·NCI-H446 细胞和HeLa 细胞培养和传代 | 第23-24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·细胞复苏 | 第24页 |
| ·lin-28 siRNA 设计 | 第24页 |
| ·siRNA 转染，以96 孔板单孔转染为例 | 第24页 |
| ·总RNA 提取 | 第24-25页 |
| ·RNA 含量测定 | 第25页 |
| ·逆转录反应 | 第25-26页 |
| ·PCR 和实时定量PCR | 第26-27页 |
| ·蛋白样品提取 | 第27页 |
| ·蛋白含量的测定 | 第27-28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28页 |
| ·转膜 | 第28页 |
| ·免疫反应 | 第28页 |
| ·显影和定影 | 第28-29页 |
| ·MTT 检测细胞生长情况 | 第29页 |
| ·流式细胞术测定细胞周期 | 第29页 |
| ·统计方法 | 第29-30页 |
| 3 实验结果 | 第30-37页 |
| ·Lin-28 基因在人小细胞肺癌细胞系NCI-H446 中表达上调，并抑制let-7 表达 | 第30-31页 |
| ·转染lin-28 siRNA 能抑制lin-28 表达 | 第31-32页 |
| ·下调Lin-28 蛋白表达能促进成熟let-7 表达 | 第32页 |
| ·抑制Lin-28 蛋白表达能抑制肺癌细胞生长并改变细胞周期 | 第32-34页 |
| ·CDC25A 表达水平变化是引起细胞周期变化的原因 | 第34-37页 |
| 4 结论 | 第37-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 6 展望 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-47页 |
| 附录A 缩写表 | 第47-48页 |
| 附录B 综述 | 第48-58页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 在学研究成果 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
