| 中文摘要 | 第1-15页 |
| 英文摘要 | 第15-18页 |
| 第一部分 SOCE相关蛋白参与重症急性胰腺炎诱导的急性肺损伤 | 第18-41页 |
| 一、前言 | 第18-19页 |
| 二、材料 | 第19-22页 |
| （一）实验动物 | 第19页 |
| （二）主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| （三）试剂与药品 | 第20-22页 |
| 三、方法 | 第22-32页 |
| （一）动物模型的制备 | 第22页 |
| （二）标本采集方法 | 第22-23页 |
| （三）各检测指标及方法 | 第23-32页 |
| 1. 胰腺、肺组织病理观察评分 | 第23页 |
| 2. 血清淀粉酶含量测定 | 第23-24页 |
| 3. 血清IL-6、TNF-ɑ 测定检测 | 第24-25页 |
| 4. 氧和指数测定 | 第25页 |
| 5. 肺组织含水量测定 | 第25页 |
| 6. 肺组织Orai1、STIM1 mRNA的检测 | 第25-28页 |
| 7. 肺组织Orai1、STIM1蛋白的检测 | 第28-31页 |
| 8. 统计方法 | 第31-32页 |
| 四、结果 | 第32-36页 |
| （一）SAP 大鼠模型制备后，大鼠一般情况和组织病理改变及病理评分 | 第32-33页 |
| 1、各实验组大鼠造模 24h 后一般情况变化 | 第32页 |
| 2、各实验组大鼠胰腺和肺组织观察 | 第32页 |
| 3、各实验组大鼠胰腺和肺组织光镜下病理改变观察 | 第32-33页 |
| （二）各组大鼠血清淀粉酶含量的变化 | 第33页 |
| （三）各组大鼠血清 IL-6、TNF-ɑ水平的变化 | 第33-34页 |
| （四）各组大鼠氧和指数变化 | 第34页 |
| （五）各组大鼠肺含水量变化 | 第34-35页 |
| （六）Orai1、STIM1 m RNA 在肺组织中表达水平的变化 | 第35页 |
| （七）肺组织中 Orai1 、STIM1 蛋白的检测结果 | 第35-36页 |
| 五、讨论 | 第36-40页 |
| 六、小结 | 第40-41页 |
| 第二部分 抑制SOCE降低重症急性胰腺炎肺损伤PMVEC凋亡 | 第41-58页 |
| 一、前言 | 第41-42页 |
| 二、材料 | 第42-44页 |
| （一）实验动物 | 第42页 |
| （二）主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| （三）试剂与药品 | 第43-44页 |
| 三、方法 | 第44-51页 |
| （一）动物模型的制备 | 第44-45页 |
| （二）标本采集方法 | 第45页 |
| （三）各检测指标及方法 | 第45-51页 |
| 1. 肺微血管内皮细胞orai1、STIM1蛋白表达 | 第45-46页 |
| 2. 肺微血管内皮细胞凋亡的检测 | 第46-47页 |
| 3.肺微血管内皮细胞超微结构观察 | 第47-48页 |
| 4. 肺组织Bax、caspase3mRNA的检测 | 第48-50页 |
| 5. 统计学方法 | 第50-51页 |
| 四、结果 | 第51-55页 |
| （一）重症急性胰腺炎大鼠模型制备后，观察大鼠一般情况和组织病理改变（同第一部分） | 第51页 |
| （二）肺微血管内皮细胞 Orai1、STIM1 蛋白表达免疫荧光检测 | 第51-52页 |
| （三）肺微血管内皮凋亡TUNEL检测 | 第52-53页 |
| （四）肺微血管内皮超微结构透射电镜观察 | 第53-54页 |
| （五）Bax 和 caspase3 m RNA 在肺组织中表达水平的变化 | 第54-55页 |
| 五、讨论 | 第55-57页 |
| 六、小结 | 第57-58页 |
| 第三部分 SOCE相关蛋白RNA干扰对LPS刺激PMVECs的影响 | 第58-96页 |
| 一、前言 | 第58-59页 |
| 二、材料 | 第59-62页 |
| （一）实验所需细胞器 | 第59页 |
| （二）主要仪器与设备 | 第59-60页 |
| （三）试剂与药品 | 第60-61页 |
| （四）配制试剂 | 第61-62页 |
| 三、方法 | 第62-74页 |
| （一）设计合成针对大鼠肺微血管内皮细胞的 STIM1 和 Orail 基因的 RNA 干扰序列 | 第62页 |
| （二）肺微血管内皮细胞培养 | 第62-64页 |
| 1. 大鼠微血管内皮细胞复苏 | 第62页 |
| 2. 大鼠微血管内皮细胞传代 | 第62-63页 |
| 3. 大鼠微血管内皮细胞冻存 | 第63页 |
| 4. 大鼠微血管内皮细胞计数 | 第63-64页 |
| 5. 大鼠微血管内皮细胞刺激 | 第64页 |
| （三）应用阳离子脂质体 2000 介导大鼠肺微血管内皮细胞 STIM1 和 Orail 基因的 RNA 干扰序列的转染 | 第64-65页 |
| 1. 大鼠微血管内皮细胞准备 | 第64页 |
| 2.配制大鼠肺微血管内皮胞 RNA 干扰序列与阳离子脂质体 2000 复合物 | 第64-65页 |
| 3.RNA 干扰序列转染大鼠肺微血管内皮细胞 | 第65页 |
| （四）Real-time PCR检测RNA干扰抑制效率 | 第65-68页 |
| （五）大鼠微血管内皮细胞实验分组 | 第68-69页 |
| （六）MTT 实验检测 RNA 干扰对 LPS 诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响 | 第69页 |
| （七）Real-time PCR 法测定 Orai1，STIM1，NFATC3，Bax 和 caspase3 转录的水平 | 第69-70页 |
| （八）肺微血管内皮细胞Orai1、STIM1蛋白的检测 | 第70-73页 |
| （九）肺微血管内皮细胞凋亡的检测 | 第73-74页 |
| （十）统计学方法 | 第74页 |
| 四、结果 | 第74-79页 |
| （一）RNA 干扰序列转染大鼠微血管内皮细胞中的效率检测 | 第74-75页 |
| （二）RNA 干扰序列转染大鼠微血管内皮细胞后对相应基因转录的抑制检测 | 第75-76页 |
| （三）STIM1 及 Orail 的 RNA 干扰对 LPS 诱导肺微血管内皮细胞损伤的影响 | 第76页 |
| （四）Real-time PCR 检测各组肺微血管内皮细胞 STIM1、Orail、NFAc3 、Bax 和 caspase3 转录的水平 | 第76-78页 |
| （五）Western blot 检测各组肺微血管内皮细胞 STIM1、Orail 表达的水平 | 第78页 |
| （六）TUNEL 检测各组肺微血管内皮细胞凋亡水平 | 第78-79页 |
| 五、讨论 | 第79-84页 |
| 六、小结 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-96页 |
| 综述 | 第96-106页 |
| 参考文献 | 第102-106页 |
| 攻读学位期间发表文章情况 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
