| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-19页 |
| ·Myostatin基因简介 | 第10-13页 |
| ·Myostatin基因的结构 | 第10页 |
| ·Myostatin基因的生物学功能 | 第10-11页 |
| ·Myostatin基因对肌肉生长的影响 | 第11-12页 |
| ·Myostatin基因的应用前景以及研究进展 | 第12-13页 |
| ·CRISPR/Cas9介绍 | 第13-18页 |
| ·基因修饰的含义以及修复机制 | 第13-14页 |
| ·CRISPR/Cas的基因座结构以及基因的分类 | 第14-15页 |
| ·CRISPR/Cas9的作用机制 | 第15-17页 |
| ·CRISPR/Cas9技术的研究进展 | 第17-18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 第二章 利用Cas9技术对兔成纤维细胞Myostatin基因进行编辑 | 第19-38页 |
| ·实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌株、材料 | 第19页 |
| ·仪器设备 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-26页 |
| ·Cas9的密码子优化 | 第20页 |
| ·pUC57-Cas9质粒设计 | 第20-21页 |
| ·打靶位点的筛选 | 第21页 |
| ·pUC57-gRNA质粒设计 | 第21页 |
| ·pUC57-Cas9、pUC57-gRNA、pEGFP-N1质粒提取 | 第21-22页 |
| ·兔子成纤维细胞的复苏及冻存 | 第22页 |
| ·转染pUC57-Cas9, pUC57-gRNA , pEGFP-N1至兔成纤维细胞 | 第22-23页 |
| ·pUC57-Cas9, pUC57-gRNA, pEGFP-N1转染兔成纤维细胞后基因组提取 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第24页 |
| ·T7 Endonease 1 酶切反应 | 第24页 |
| ·pUC57-Cas9/pUC57-gRNA摩尔数之比为 2:1 的细胞单克隆化 | 第24-25页 |
| ·PCR产物连接T载体 | 第25页 |
| ·WB检测兔成纤维细胞Myostatin蛋白表达情况 | 第25页 |
| ·打靶位点特异性鉴定 | 第25-26页 |
| ·实验结果 | 第26-38页 |
| ·Cas9密码子优化结果 | 第26-27页 |
| ·pUC57-Cas9质粒的设计结果 | 第27页 |
| ·打靶位点筛选结果 | 第27-29页 |
| ·pUC57-gRNA质粒的设计结果 | 第29-30页 |
| ·pUC57-Cas9、pUC57-gRNA以及pEGFP-N1质粒单酶切鉴定结果 | 第30页 |
| ·兔子成纤维细胞的复苏结果 | 第30-31页 |
| ·转染pUC57-Cas9, pUC57-gRNA, pEGFP-N1至成纤维细胞结果 | 第31页 |
| ·基因组提取结果 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增结果 | 第32页 |
| ·T7 Endonease 1 酶切结果 | 第32-33页 |
| ·转染CRISPR/Cas9为 2:1 的兔成纤维细胞克隆化结果 | 第33-35页 |
| ·碱基突变结果 | 第35-36页 |
| ·WB检测兔成纤维细胞Myostatin蛋白表达结果 | 第36-37页 |
| ·打靶位点特异性鉴定结果 | 第37-38页 |
| 第三章 讨论 | 第38-41页 |
| 第四章 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 附录 | 第48-53页 |
| 个人简历 | 第53页 |
