| 内容摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| 1. NEK2激酶及其功能 | 第16-19页 |
| ·NEK激酶家族 | 第16-17页 |
| ·NEK2激酶的结构 | 第17-18页 |
| ·NEK2激酶的功能 | 第18-19页 |
| 2. NEK2激酶与癌症的关系 | 第19-23页 |
| ·NEK2激酶与肿瘤发生 | 第20页 |
| ·NEK2激酶与肿瘤耐药 | 第20-22页 |
| ·NEK2激酶与肿瘤预后 | 第22-23页 |
| 3. NEK2激酶抑制剂的研究现状 | 第23-24页 |
| 4. 研究目的和研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 NEK2抑制剂筛选 | 第26-36页 |
| 1. 实验材料 | 第26-28页 |
| ·化合物及试剂 | 第26-27页 |
| ·主要耗材 | 第27页 |
| ·化合物 | 第27页 |
| ·细胞株及培养条件 | 第27-28页 |
| 2. 实验仪器 | 第28页 |
| 3. 实验方法 | 第28-30页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·化合物NEK2激酶抑制活性筛选 | 第29-30页 |
| ·利用EZ Reader药物筛选平台筛选化合物 | 第29页 |
| ·利用HTRF(?) KinEASE~(TM)-STK(Cisbio Assays)筛选化合物 | 第29-30页 |
| ·化合物体外细胞生长抑制活性筛选 | 第30页 |
| 4. 实验结果 | 第30-34页 |
| ·分子水平MBM系列化合物筛选 | 第30-32页 |
| ·EZ Reader检测29个候选化合物对NEK2激酶的活性抑制作用 | 第30-31页 |
| ·HTRF(?) KinEASE~(TM)-STK试剂盒验证MBM-5对NEK2激酶的抑制作用 | 第31-32页 |
| ·MBM-5能有效抑制MGC-803肿瘤细胞增殖 | 第32-34页 |
| 5. 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 新型NEK2抑制剂MBM-5的体内外抗肿瘤活性研究 | 第36-62页 |
| 1. 实验材料 | 第36-39页 |
| ·化合物及试剂 | 第36-37页 |
| ·主要耗材 | 第37页 |
| ·化合物 | 第37页 |
| ·细胞株及培养条件 | 第37-38页 |
| ·实验动物 | 第38-39页 |
| 2. 实验仪器 | 第39页 |
| 3. 实验方法 | 第39-45页 |
| ·体外细胞水平检测实验方法 | 第39-43页 |
| ·化合物体外细胞生长抑制活性检测 | 第39-40页 |
| ·免疫印迹 | 第40-42页 |
| ·统计分析 | 第42-43页 |
| ·体内检测实验方法 | 第43-45页 |
| ·体内药物最大耐受剂量(MTD)检测 | 第43页 |
| ·小鼠肿瘤细胞皮下接种 | 第43页 |
| ·小鼠分组 | 第43-44页 |
| ·小鼠腹腔注射 | 第44页 |
| ·数据处理 | 第44页 |
| ·SD大鼠药代的实验方法 | 第44-45页 |
| ·统计分析 | 第45页 |
| 4. 实验结果 | 第45-60页 |
| ·新型NEK2抑制剂MBM-5的体外抗肿瘤活性研究 | 第45-50页 |
| ·小分子化合物MBM-5能抑制多种癌细胞的生长 | 第45-47页 |
| ·MBM-5对NEK2高表达的细胞株具有较好的增值抑制作用 | 第47-48页 |
| ·小分子化合物MBM-5抑制肿瘤细胞生长的形态学观察 | 第48-50页 |
| ·新型NEK2抑制剂MBM-5的体内药效学评价 | 第50-57页 |
| ·MBM-5体内药物最大耐受剂量(MTD)检测 | 第50-51页 |
| ·MBM-5腹腔注射给药能一定程度上抑制裸鼠体内肿瘤生长 | 第51-57页 |
| ·MBM-5的药物代谢研究 | 第57-60页 |
| 5. 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 MBM5抗肿瘤作用的分子机制研究 | 第62-91页 |
| 1. 实验材料 | 第62-63页 |
| ·化合物及试剂 | 第62-63页 |
| ·主要耗材 | 第63页 |
| ·化合物 | 第63页 |
| ·细胞株及培养条件 | 第63页 |
| 2. 实验仪器 | 第63页 |
| 3. 实验方法 | 第63-68页 |
| ·细胞周期PI检测法 | 第63-64页 |
| ·细胞凋亡AnnexinV-FITC检测法 | 第64-65页 |
| ·免疫荧光 | 第65-66页 |
| ·细胞周期同步化 | 第66-67页 |
| ·免疫印迹 | 第67页 |
| ·细胞转染 | 第67-68页 |
| ·统计分析 | 第68页 |
| 4. 实验结果 | 第68-87页 |
| ·MBM-5能有效阻滞肿瘤细胞的细胞周期进程 | 第68-78页 |
| ·MBM-5能将肿瘤细胞阻滞在G2/M期,并伴有多倍体形成 | 第68-70页 |
| ·细胞同步化后,MBM-5也能有效阻滞细胞在G2/M期 | 第70-73页 |
| ·MBM-5干扰细胞有丝分裂,使染色体排布紊乱,形成多核细胞 | 第73-77页 |
| ·MBM-5对肿瘤细胞核形态变化的影响 | 第77-78页 |
| ·MBM-5具有诱导细胞凋亡的作用 | 第78-81页 |
| ·AnnexinV-FITC试剂盒检测MBM-5具有诱导细胞凋亡的作用 | 第78-80页 |
| ·Western Blot检测凋亡标志蛋白PARP-1及c-Caspase3的表达 | 第80-81页 |
| ·MBM-5通过抑制NEK2及其相关蛋白的表达来抑制肿瘤细胞增殖 | 第81-84页 |
| ·MBM-5可能通过泛素-蛋白酶体途径降解NEK2及其相关蛋白Hec1 | 第84-85页 |
| ·可能由于细胞内源性NEK2表达干扰,MBM-5对过表达外源NEK2的细胞株的增值抑制作用与亲本株无异 | 第85-87页 |
| 5. 讨论 | 第87-91页 |
| 第五章 总结 | 第91-93页 |
| 附录 | 第93-96页 |
| 攻读硕士学位期间所发表文章及首页 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97-98页 |
| 缩略词 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
