| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一部分 山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响 | 第12-32页 |
| 一、实验材料 | 第12-14页 |
| (一) 实验用品 | 第12-13页 |
| (二) 实验仪器 | 第13页 |
| (三) 试剂配制 | 第13-14页 |
| 1、D-Hanks液配制 | 第13页 |
| 2、胰蛋白酶溶液配制 | 第13-14页 |
| 3、PBS的配制 | 第14页 |
| 4、10%福尔马林固定液配制 | 第14页 |
| 5、油红O染色液配制 | 第14页 |
| 6、成脂分化诱导液配制 | 第14页 |
| 7、药物的配制 | 第14页 |
| 二、实验方法 | 第14-20页 |
| (一) 山核桃叶黄酮单体化合物的制备 | 第14-15页 |
| (二) C3H10T1/2细胞的培养 | 第15页 |
| 1、C3H10T1/2细胞复苏 | 第15页 |
| 2、C3H10T1/2细胞传代培养 | 第15页 |
| 3、C3H10T1/2细胞冻存 | 第15页 |
| (三) C3H10T1/2细胞成脂分化模型的建立 | 第15-16页 |
| 1、C3H10T1/2细胞培养 | 第15页 |
| 2、C3H10T1/2细胞成脂诱导 | 第15-16页 |
| 3、C3H10T1/2细胞成脂诱导过程中形态学观察 | 第16页 |
| 4、油红O染色法鉴定成熟脂肪细胞 | 第16页 |
| 5、实时荧光定量PCR检测成脂分化中关键转录因子和成脂分化标志物的表达 | 第16页 |
| (四) MTS检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞增殖的影响 | 第16-17页 |
| 1、C3H10T1/2细胞培养 | 第16页 |
| 2、实验分组 | 第16-17页 |
| 3、MTS检测细胞增殖 | 第17页 |
| (五) 油红O染色检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响 | 第17-18页 |
| 1、C3H10T1/2细胞培养 | 第17页 |
| 2、实验分组 | 第17页 |
| 3、药物处理 | 第17页 |
| 4、油红O染色检测成脂分化结果 | 第17-18页 |
| (六) GAP-PAP酶法检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化过程中甘油三酯含量的影响 | 第18-19页 |
| 1、C3H10T1/2细胞培养 | 第18页 |
| 2、实验分组 | 第18页 |
| 3、药物处理 | 第18页 |
| 4、C3H10T1/2细胞总蛋白的提取 | 第18页 |
| 5、BCA法测定蛋白浓度 | 第18-19页 |
| 6、GAP-PAP酶法检测成脂分化结果 | 第19页 |
| (七) 统计分析 | 第19-20页 |
| 三、实验结果 | 第20-30页 |
| (一) 山核桃叶黄酮单体化合物结构式 | 第20页 |
| (二) C3H10T1/2细胞成脂分化模型 | 第20-22页 |
| 7、C3H10T1/2细胞成脂分化过程中形态变化 | 第20-21页 |
| 8、油红染色法鉴定成熟脂肪细胞 | 第21页 |
| 9、实时荧光定量PCR检测成脂分化中关键转录因子和成脂分化标志物的表达 | 第21-22页 |
| (三) 山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞增殖活性的影响 | 第22-24页 |
| (四) 油红O染色检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化的影响 | 第24-28页 |
| (五) GAP-PAP酶法检测山核桃叶黄酮苷元对C3H10T1/2细胞成脂分化过程中甘油三酯含量的影响 | 第28-30页 |
| 四、讨论 | 第30-31页 |
| 五、小结 | 第31-32页 |
| 第二部分 山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化影响作用机制的研究 | 第32-51页 |
| 一、实验材料 | 第32-35页 |
| (一) 实验用品 | 第32-33页 |
| (二) 实验仪器 | 第33-34页 |
| (三) 试剂配制 | 第34-35页 |
| 1、配胶用试剂 | 第34页 |
| 2、电泳缓冲液 | 第34页 |
| 3、转膜缓冲液 | 第34页 |
| 4、10%分离胶 | 第34-35页 |
| 5、5%浓缩胶 | 第35页 |
| 6、10×TBS | 第35页 |
| 7、TBST | 第35页 |
| 8、5%脱脂奶粉 | 第35页 |
| 二、实验方法 | 第35-41页 |
| (一) 细胞培养 | 第35页 |
| (二) 实时荧光定量PCR检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化标志因子FABP4及关键转录因子PPARγ、C/EBPα mRNA相对表达量的影响 | 第35-38页 |
| 1、细胞接种及加药 | 第35-36页 |
| 2、Trizol法抽提C3H10T1/2细胞中总RNA | 第36页 |
| 3、总RNA浓度和纯度的测定 | 第36页 |
| 4、cDNA的制备 | 第36-37页 |
| 5、PPARγ、C/EBPα、FABP4的定量检测 | 第37-38页 |
| (三) Western Blot检测山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化标志因子FABP4及关键转录因子PPARγ、C/EBPα蛋白表达的影响 | 第38-41页 |
| 1、细胞接种及加药 | 第38页 |
| 2、C3H10T1/2细胞总蛋白的提取 | 第38-39页 |
| 3、BCA法测定蛋白浓度 | 第39页 |
| 4、SDS-PAGE电泳 | 第39-40页 |
| 5、转膜 | 第40页 |
| 6、封闭及杂交 | 第40页 |
| 7、显影 | 第40-41页 |
| 三、实验结果 | 第41-48页 |
| (一) 山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化标志因子FABP4及关键转录因子PPARγ、C/EBPα mRNA相对表达量的影响 | 第41-44页 |
| (二) 山核桃叶黄酮对C3H10T1/2细胞成脂分化标志因子FABP4及关键转录因子PPARγ、C/EBPα蛋白表达的影响 | 第44-48页 |
| 四、讨论 | 第48-49页 |
| 五、小结 | 第49-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 文献综述 | 第56-66页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
