| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 综述 | 第9-19页 |
| 1 转基因小鼠 | 第9-11页 |
| 2 转基因可控表达的方法 | 第11-16页 |
| ·Cre/LoxP 位点特异性重组系统 | 第12-14页 |
| ·Tet 诱导表达系统 | 第14-16页 |
| 3 RAS 基因 | 第16-18页 |
| 4 选题依据及研究意义 | 第18-19页 |
| 第二章 转基因表达载体构建 | 第19-30页 |
| 1 实验材料 | 第19-20页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·实验试剂 | 第19-20页 |
| ·实验仪器 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-26页 |
| ·线性化 pClhl-IG 质粒和 pClkhl-IG 质粒的获取 | 第20-22页 |
| ·tTA 片段的获取 | 第22页 |
| ·重组质粒连接 | 第22-23页 |
| ·菌落 PCR | 第23-24页 |
| ·测序 | 第24-25页 |
| ·电转所需片段的获取 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-28页 |
| ·线性化 pClhl-IG 质粒和 pClkhl-IG 质粒的获取 | 第26页 |
| ·tTA 片段的获取 | 第26-27页 |
| ·pClkhl-tTA-IRES-GFP 和 pClhl-tTA-IRES-GFP 质粒菌落 PCR | 第27页 |
| ·pClkhl-tTA-IRES-GFP 和 pClhl-tTA-IRES-GFP 质粒测序 | 第27页 |
| ·电转所需片段的获取 | 第27-28页 |
| 4 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 用于囊胚注射 ES 的构建 | 第30-42页 |
| 1 实验材料 | 第30-31页 |
| ·细胞及试剂 | 第30-31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| 2 实验方法 | 第31-37页 |
| ·两种目的片段阳性克隆率比较 | 第31-33页 |
| ·高表达 ES 克隆的制备 | 第33-34页 |
| ·ES 细胞水平上 tTA 功能验证 | 第34-35页 |
| ·ES 细胞 tTA 基因拷贝数鉴定 | 第35-37页 |
| 3 结果 | 第37-40页 |
| ·两种目的片段阳性克隆率比较 | 第37-38页 |
| ·ES 细胞水平上 tTA 功能验证 | 第38-39页 |
| ·ES 细胞 tTA 基因拷贝数鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 CL-TTA 转基因小鼠的制备及鉴定 | 第42-50页 |
| 1 实验材料 | 第42-43页 |
| ·实验试剂 | 第42-43页 |
| ·实验仪器 | 第43页 |
| 2 实验方法 | 第43-46页 |
| ·转基因小鼠制备 | 第43页 |
| ·交配小鼠 | 第43页 |
| ·PCR 鉴定子代小鼠 | 第43-45页 |
| ·转基因小鼠细胞水平 tTA 功能验证 | 第45-46页 |
| ·转基因小鼠 tTA 基因拷贝数鉴定 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·嵌合体小鼠与 FVB 野生型小鼠交配子代小鼠基因型鉴定 | 第46-47页 |
| ·转基因小鼠细胞水平 tTA 功能验证 | 第47-48页 |
| ·转基因小鼠 tTA 基因拷贝数鉴定 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 CL-TTA/TRE-KRAS-G12D 基因型小鼠的肿瘤分析 | 第50-57页 |
| 1 实验材料 | 第50页 |
| ·实验试剂 | 第50页 |
| ·实验仪器 | 第50页 |
| 2 实验方法 | 第50-53页 |
| ·获得双阳性小鼠 | 第50-51页 |
| ·CL-tTA/TRE-Kras-G12D 转基因小鼠肺部肿瘤的诱导 | 第51-52页 |
| ·CL-tTA/TRE-Kras-G12D 转基因小鼠皮肤肿瘤的诱导 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-55页 |
| ·CL-tTA 阳性小鼠与 TRE-Kras-G12D 小鼠交配 F2 代小鼠基因型鉴定 | 第53页 |
| ·CL-tTA/TRE-Kras-G12D 转基因小鼠肺部肿瘤的诱导 | 第53-54页 |
| ·CL-tTA/TRE-Kras-G12D 转基因小鼠皮肤肿瘤的诱导 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
