| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-24页 |
| ·开菲尔粒及其乳酸菌 | 第8-11页 |
| ·开菲尔粒 | 第8页 |
| ·开菲尔粒菌相研究 | 第8-10页 |
| ·开菲尔粒中的乳酸菌菌群 | 第10-11页 |
| ·乳酸菌的胞外多糖 | 第11-17页 |
| ·乳酸菌胞外多糖的生理功能 | 第11-12页 |
| ·乳酸菌胞外多糖的生物合成机制 | 第12-16页 |
| ·乳酸菌胞外多糖生物合成的基因簇以及管家基因的研究 | 第16-17页 |
| ·马奶酒样乳杆菌及其胞外多糖研究 | 第17-22页 |
| ·马奶酒样乳杆菌基本特征 | 第17-18页 |
| ·马奶酒样乳杆菌胞外多糖 | 第18-19页 |
| ·马奶酒样乳杆菌ZW3 | 第19-22页 |
| ·本论文研究的意义与主要内容 | 第22-24页 |
| ·本论文研究的意义 | 第22页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第22-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-40页 |
| ·材料 | 第24-30页 |
| ·菌株与质粒以及引物 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-26页 |
| ·仪器与设备 | 第26-27页 |
| ·抗生素 | 第27页 |
| ·工具酶及DNA、蛋白Marker | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·实验标准溶液的配制 | 第28-30页 |
| ·实验方法 | 第30-40页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3染色体DNA的提取 | 第31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·目的基因的扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32页 |
| ·质粒pMG36e的提取(CTAB提取法) | 第32-33页 |
| ·质粒pMG36e,pET30a与基因的酶切与连接 | 第33-34页 |
| ·重组质粒在乳酸菌和大肠杆菌中的转化 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的验证 | 第35-37页 |
| ·苯酚-硫酸法标准曲线的绘制 | 第37页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3野生菌及其过表达菌株Lb.kefiranofaciens ZW3/pMG36e-pgm2胞外多糖产量的测定 | 第37-38页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3野生菌及其过表达菌株Lb.kefiranofaciens ZW3/pMG36e-pgm2生长曲线的测定 | 第38页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3野生菌及其过表达菌株Lb.kefiranofaciens ZW3/pMG36e-pgm2蛋白的表达 | 第38页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测 | 第38-39页 |
| ·在线网络服务器和生物信息学软件 | 第39-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-53页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3管家基因—α-磷酸葡萄糖变位酶pgm2的获得 | 第40-41页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3基因组DNA的提取 | 第40页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3管家基因——α-磷酸葡萄糖变位酶pgm2的扩增 | 第40-41页 |
| ·α -磷酸葡萄糖变位酶pgm2在E.coli BL21中的克隆表达 | 第41-44页 |
| ·大肠杆菌重组质粒pET30a-pgm2的构建 | 第41页 |
| ·重组质粒pET30a-pgm2在大肠杆菌BL21中的转化以及验证 | 第41-43页 |
| ·大肠杆菌重组质粒pET30a-pgm2的验证 | 第43页 |
| ·重组菌株E.coli BL21/pET30a-pgm2重组蛋白的表达 | 第43-44页 |
| ·α-磷酸葡萄糖变位酶pgm2在Lb.kefiranofaciens ZW3中的克隆转化 | 第44-48页 |
| ·重组质粒pMG36e-pgm2的构建 | 第44页 |
| ·乳酸菌重组质粒pMG36e-pgm2电转化条件的优化 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pMG36e-pgm2的转化以及验证 | 第45-48页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3以及转化菌株Lb.kefiranofaciens ZW3/pMG36e-pgm2生长特性分析 | 第48-49页 |
| ·转化菌株Lb.kefiranofaciens ZW3/pMG36e-pgm2蛋白的表达 | 第49-50页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3以及转化菌株产糖曲线的测定 | 第50-53页 |
| ·葡萄糖标准曲线的制定 | 第50页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3产糖量的测定 | 第50-51页 |
| ·Lb.kefiranofaciens ZW3野生菌与转化菌株产糖量的测定 | 第51-53页 |
| 4 结论 | 第53-54页 |
| 5 展望 | 第54-55页 |
| 6 参考文献 | 第55-63页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第63-64页 |
| 8 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
