| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 1. 文献综述 | 第11-23页 |
| ·菠萝凋萎相关病毒研究进展 | 第11-16页 |
| ·菠萝凋萎相关病毒生物学特性及其危害 | 第11-12页 |
| ·PMWaV基因组结构与同源性分析 | 第12-13页 |
| ·PMWaV传播途径与致病机制 | 第13-14页 |
| ·菠萝凋萎病毒检测 | 第14-15页 |
| ·菠萝凋萎病的防治 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量PCR研究进展 | 第16-19页 |
| ·实时荧光定量PCR的原理 | 第16-17页 |
| ·荧光化学 | 第17-18页 |
| ·实时荧光定量PCR的定量方法 | 第18-19页 |
| ·实时荧光定量PCR技术在植物病毒研究中的应用 | 第19-21页 |
| ·实时荧光定量PCR技术在植物病毒定性研究中的应用 | 第19-20页 |
| ·实时荧光定量PCR技术在植物病毒定量研究中的应用 | 第20页 |
| ·实时荧光定量PCR技术在抗病毒活性物质研究中的应用 | 第20-21页 |
| ·多重实时荧光定量PCR技术在植物病毒检测研究中的应用 | 第21页 |
| ·研究目的意义与技术路线 | 第21-23页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究意义 | 第21-22页 |
| ·研究技术路线 | 第22-23页 |
| 2. 材料与方法 | 第23-30页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·引物设计及相关数据分析软件 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-30页 |
| ·引物和探针的设计与合成 | 第23-24页 |
| ·菠萝叶片总RNA的提取 | 第24页 |
| ·第一链cDNA合成 | 第24页 |
| ·普通PCR扩增目的片段 | 第24-25页 |
| ·普通PCR扩增目的片段回收 | 第25页 |
| ·连接 | 第25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·抗生素筛选阳性克隆 | 第25页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第25-26页 |
| ·测序分析 | 第26页 |
| ·重组质粒提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒标准品模板的制备 | 第27页 |
| ·探针适用性验证 | 第27页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCR引物浓度、探针浓度和缓冲液浓度优化 | 第27-28页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第28页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCR检测方法评价 | 第28-29页 |
| ·PMWaV-1,2,3三重实时荧光定量RT-PCR检测方法优化 | 第29页 |
| ·三重实时荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第29-30页 |
| ·三重实时荧光定量RT-PCR检测方法抗干扰实验 | 第30页 |
| ·三重实时荧光定量RT-PCR检测方法灵敏度实验 | 第30页 |
| ·三重实时荧光定量RT-PCR检测方法重复性实验 | 第30页 |
| ·样品检测 | 第30页 |
| 3. 结果与分析 | 第30-52页 |
| ·菠萝叶片总RNA提取结果 | 第30-31页 |
| ·普通RT-PCR扩增目的片段 | 第31-32页 |
| ·目的片段回收 | 第32-33页 |
| ·菌液PCR | 第33页 |
| ·质粒提取 | 第33-34页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第34-35页 |
| ·探针适用性实验 | 第35-36页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCP反应体系优化结果 | 第36-39页 |
| ·PMWaV-1单重实时荧光定量RT-PCP反应体系优化结果 | 第36-37页 |
| ·PMWaV-2单重实时荧光定量RT-PCP反应体系优化结果 | 第37-38页 |
| ·PMWaV-3单重实时荧光定量RT-PCP反应体系优化结果 | 第38-39页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第39-41页 |
| ·单重实时荧光定量RT-PCR检测方法评价 | 第41-45页 |
| ·特异性检测 | 第41-42页 |
| ·灵敏度检测 | 第42-43页 |
| ·重复性 | 第43-45页 |
| ·三重实时荧光定量RT-PCR检测方法优化结果 | 第45-46页 |
| ·三重荧光定量RT-PCR检测方法标准曲线的建立 | 第46-47页 |
| ·三重荧光定量RT-PCR检测方法抗干扰实验 | 第47-48页 |
| ·三重荧光定量RT-PCR体系灵敏度检测 | 第48-49页 |
| ·三重荧光定量RT-PCR检测方法重复性 | 第49-51页 |
| ·样品检测 | 第51-52页 |
| 4. 讨论 | 第52-54页 |
| ·本研究的创新性 | 第52页 |
| ·引物和探针的设计 | 第52-53页 |
| ·构建标准曲线的标准品的选择 | 第53页 |
| ·多重实时荧光定量RT-PCR反应体系的优化 | 第53-54页 |
| ·样品检测 | 第54页 |
| 5. 结论 | 第54-56页 |
| ·PMWaV-1,2,3单重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第54-55页 |
| ·PMWaV-1,2,3三重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录A 部分英文缩略词 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
