| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-6页 |
| 缩略语 | 第6-10页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-16页 |
| 1 研究目的与意义 | 第10-11页 |
| 2 国内外研究进展 | 第11-16页 |
| ·口蹄疫病毒基因组的基本结构和功能 | 第11页 |
| ·口蹄疫病毒结构蛋白及其功能 | 第11-12页 |
| ·口蹄疫病毒非结构蛋白及其功能 | 第12页 |
| ·口蹄疫病毒抗原表位的研究进展 | 第12-13页 |
| ·口蹄疫 ELISA 检测方法的研究进展 | 第13-15页 |
| ·ELISA 在口蹄疫抗原表位研究中的应用 | 第13-14页 |
| ·ELISA 用于感染动物与免疫动物的鉴别诊断 | 第14页 |
| ·单克隆抗体在 ELISA 中的应用 | 第14-15页 |
| ·ELISA 技术的发展前景 | 第15-16页 |
| 第二篇 研究内容 | 第16-40页 |
| 第一章 一株 3A 单抗识别表位的初步鉴定 | 第16-24页 |
| 1 材料 | 第16页 |
| ·菌株、载体和质粒等 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16页 |
| 2 实验方法 | 第16-21页 |
| ·3A 肽段基因的 PCR 扩增 | 第16-19页 |
| ·引物设计 | 第17页 |
| ·扩增 3a1 和 3a2 基因 | 第17页 |
| ·PCR 产物的回收与纯化 | 第17-18页 |
| ·PCR 产物与 pET-30a 载体的双酶切 | 第18页 |
| ·目的基因与载体的连接 | 第18-19页 |
| ·转化到感受态细胞 | 第19页 |
| ·重组质粒的提取与测序 | 第19页 |
| ·融合 3A 肽段的诱导表达 | 第19-20页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第19-20页 |
| ·表达肽段的 SDS-PAGE 检测 | 第20页 |
| ·表位肽的 western blot 鉴定 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-23页 |
| ·3a1 和 3a2 肽段基因的 PCR 扩增 | 第21页 |
| ·融合 3A1、3A2 肽段的诱导表达 | 第21-22页 |
| ·表位肽的 Western blot 鉴定 | 第22-23页 |
| 4 讨论 | 第23-24页 |
| 第二章 3A 单抗阻断 ELISA 方法的建立 | 第24-37页 |
| 1 材料 | 第24-25页 |
| ·蛋白及抗体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·标准血清 | 第24页 |
| ·血清样品的背景 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-29页 |
| ·非结构蛋白 2C 多克隆抗体的纯化 | 第25页 |
| ·非结构蛋白 3A 单克隆抗体的纯化 | 第25-26页 |
| ·非结构蛋白 3A 单克隆抗体的标记 | 第26页 |
| ·纯化 2C 多抗与 3A 单抗的鉴定 | 第26-27页 |
| ·纯化 2C 多抗与 3A 单抗的 SDS-PAGE 检测 | 第26页 |
| ·酶标 3A 单抗效价的检测 | 第26-27页 |
| ·纯化后 2C 多抗与酶标 3A 单抗蛋白浓度的测定 | 第27页 |
| ·建立 ELISA 方法流程 | 第27页 |
| ·滴定 2C3AB 抗原的工作浓度 | 第27页 |
| ·滴定 2C 多克隆抗体的工作浓度 | 第27-28页 |
| ·滴定 3A 单克隆抗体的工作浓度 | 第28页 |
| ·最佳血清稀释度的确定 | 第28页 |
| ·血清最佳反应时间及反应温度的确定 | 第28页 |
| ·制定 FMDV SPB-ELISA 的标准操作流程 | 第28页 |
| ·阴阳性判定标准的确定 | 第28-29页 |
| 3 结果 | 第29-35页 |
| ·纯化 2C 多抗的 SDS-PAGE 分析 | 第29页 |
| ·纯化 3A 单抗的 SDS-PAGE 分析 | 第29-30页 |
| ·酶标 3A 单抗效价的检测 | 第30页 |
| ·非结构蛋白 2C 多抗、3A 单抗及 2C3AB 蛋白浓度的检测 | 第30-31页 |
| ·非结构蛋白 2C3AB 最佳工作浓度的确定结果 | 第31页 |
| ·非结构蛋白 2C 多抗最佳工作浓度的确定结果 | 第31页 |
| ·非结构蛋白 3A 单克隆抗体最佳工作浓度的确定结果 | 第31-32页 |
| ·最佳血清稀释度的确定结果 | 第32页 |
| ·血清最佳反应时间及反应温度的确定结果 | 第32-33页 |
| ·FMDV SPB-ELISA 的操作流程 | 第33页 |
| ·阴、阳性血清判定标准（临界值）的确定结果 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 3A 单抗阻断 ELISA 效果的评价 | 第37-40页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| ·血清样品背景 | 第37页 |
| ·相关试剂盒 | 第37页 |
| ·主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-38页 |
| ·特异性及敏感性检测 | 第37-38页 |
| ·与 PrioCHECK FMDV-NS ELISA 试剂盒和 FMD 3ABC I-ELISA 试剂盒的符合率对比 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| ·特异性及敏感性判定结果 | 第38页 |
| ·与 PrioCHECK FMDV-NS ELISA 试剂盒和 FMD 3ABC I-ELISA 试剂盒的符合率对比 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 全文结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 作者简介 | 第49-50页 |
| 导师简介 | 第50-52页 |
